制备重组LD78β蛋白的新工艺

摘要

本发明涉及重组蛋白制备领域，具体公开了一种重组LD78β蛋白的制备工艺，利用基因工程的方法，人工合成表达重组LD78β蛋白的重组基因EK-LD78β，将该重组基因序列插入载体，转化宿主细胞，通过发酵，分离、酶切、纯化等步骤获得重组LD78β蛋白。本发明的制备方法操作安全、简单、产品特异性高，有利于LD78β蛋白的大规模生产。

主权项

一种重组LD78β蛋白的制备工艺，具体步骤如下：1）人工合成表达重组LD78β蛋白的重组基因EK‑LD78β，所述重组基因EK‑LD78β的序列包括左右两端的限制性酶切位点序列，以及两端限制性酶切位点序列之间的、5’至3’方向依次排列的肠激酶识别位点序列和重组LD78β蛋白基因序列；2）重组质粒的构建：将上一步的重组基因EK‑LD78β插入载体，获得含有重组LD78β蛋白基因序列的重组质粒；3）基因工程菌的制备：将上一步获得的重组质粒转化宿主细胞制备基因工程菌；4）外源基因的表达：基因工程菌发酵表达含有重组LD78β蛋白的融合蛋白；5）目的蛋白的纯化：裂解菌体，收集融合蛋白，通过融合蛋白的酶切、纯化步骤获得重组LD78β蛋白产品。