构建核酸库的方法、试剂及试剂盒

摘要

本发明为建立具有标签的核酸库提供了方法、试剂及试剂盒，并采用了体外转座的方法。首先用转座酶随机打断目标DNA，然后用核酸酶和DNA聚合酶处理，然后连接上所需的寡核苷酸序列，产生有标记的DNA文库。本发明允许连接任何所需标记的DNA片段，使所产生标记的DNA片段，可以直接应用到不同的第二代测序平台，包括但不限于由ILLUMINA，LifeTechnologies（ABI），Roche，HELICOSBiotechnologies，PacificBiosciences这些公司制造的仪器，同样也适用于其它厂商生产的测序仪。

主权项

一种随机断裂并同时标记DNA片段的方法，其特征在于，包括以下步骤:转座酶、双链转座子及目标DNA混合后进行反应，就是在转座酶的催化作用下，双链的转座子末端序列随机插入目标DNA 序列中；形成被转座子末端序列标记的DNA片段，这些片段从5'至3'，始于双链转座子末端序列，继而是9个碱基对的单链DNA序列，然后是双链目标DNA片段，9个碱基对BP的单链DNA序列和双链转座子末端;将标记于目标DNA两端的转座子末端序列的双链解开成单链.去除单链转座子末端序列，生成未标记的DNA片段.在未标记的DNA片断上连接需要的DNA标签，产生一个有新的标签的DNA片段。