分化成均一之神经细胞之方法

摘要

本发明系揭露一种分化成均一之神经细胞之方法，其步骤包括：将类胚胎体培养于含有第一培养基之第一培养皿中，再加入诱导剂，使得类胚胎体分化成神经前驱细胞，接着，利用细胞滤器将含有神经前驱细胞之第一培养基过滤，以取得神经前驱细胞。尔后，加入分离剂于神经前驱细胞中，并淹没神经前驱细胞，使分离剂与神经前驱细胞作用7-9分钟，进而使神经前驱细胞彼此分散，再将分散之神经前驱细胞培养于含有第二培养基之第二培养皿中，使神经前驱细胞分化为均一之神经细胞。

主权项

一种分化成均一之神经细胞之方法，其步骤包括：将一类胚胎体培养于含有一第一培养基之一第一培养皿中；加入一诱导剂于含有该类胚胎体之该第一培养皿中，使该类胚胎体分化成一神经前驱细胞；利用一细胞滤器将含有该神经前驱细胞之该第一培养基过滤，以取得该神经前驱细胞；加入一分离剂于该神经前驱细胞中，并使该分离剂淹没该神经前驱细胞，且该分离剂与该神经前驱细胞作用7-9分钟，使该神经前驱细胞彼此分散；以及将经分散之该神经前驱细胞培养于含有一第二培养基之一第二培养皿中，使该神经前驱细胞分化为均一之一神经细胞。如申请专利范围第1项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该类胚胎体系为一胚胎干细胞、一癌症干细胞或一诱导性多效能干细胞聚集而成。如申请专利范围第1项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该诱导剂包括视黄醛酸。如申请专利范围第1项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该分离剂系为一胰蛋白酶与一乙二胺四乙酸之混合溶液。如申请专利范围第4项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该胰蛋白酶之重量百分比浓度系为0.02-0.08%。如申请专利范围第4项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该乙二胺四乙酸之重量百分比浓度系为0.01-0.03%。如申请专利范围第1项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中经分散之该神经前驱细胞培养于该第二培养皿中之细胞密度系为1.0-1.5×105/平方公分。如申请专利范围第1项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该第一培养基包括一类胚胎体培养基。如申请专利范围第8项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该类胚胎体培养基包括β-巯基乙醇、L-谷胺醯胺、丙酮酸钠、非必需胺基酸或胎牛血清。如申请专利范围第1项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该第一培养皿包括一细菌性培养皿。如申请专利范围第1项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该第二培养基包括一N2培养基或一神经-基础-B27培养基。如申请专利范围第11项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该N2培养基包括L-谷胺醯胺、F-12细胞培养液、胰岛素、运铁蛋白、黄体素、腐胺亚硒酸钠或牛血清白蛋白。如申请专利范围第1项所述之分化成均一之神经细胞之方法，其中该第二培养皿包括聚乌氨酸/层黏连蛋白或聚离氨基酸所涂布之培养皿。