利用可视薄膜感受器芯片检测特异核苷酸序列的方法

摘要

本发明提供了一种利用可视薄膜感受器芯片技术检测特异核苷酸序列和SNP标记(或点突变)的方法。将特异序列的单链寡核苷酸作为捕捉探针通过乙醛共价结合于肼衍生的感受器芯片表面；然后通过生物素标记的PCR产物与捕捉探针杂交，可以鉴定特异的DNA序列，或者捕捉探针、在生物素标记的检测探针和PCR产物同时进行杂交和连接反应，可以鉴定位点突变序列(如SNP位点)；最后将芯片与辣根过氧化物酶标记的生物素抗体温育，加底物显色，如果PCR产物中存在特异目标序列，那么芯片的表面会有肉眼可辨的颜色变化，金色变为蓝色或紫色。这项检测技术快速、准确、低廉、灵敏度高、特异性强，并且低通量和高通量可自由选择，非常经济实惠。

主权项

一种利用可视薄膜感受器芯片检测特异DNA序列的方法，包括以下步骤：1)将特异序列的单链寡核苷酸探针通过乙醛共价结合于肼衍生的可视薄膜感受器芯片表面，该探针从5’到3’端依次是10‑12个碱基的脱氧腺嘌呤残基和35‑50个碱基的与特异DNA序列完全匹配的正向链序列；2)PCR扩增待测样品的目标DNA序列，其中反向引物5’端带有共价结合的生物素；3)将变性后的PCR产物与芯片进行杂交，洗涤，而且其中杂交液为5×SSC和5mg/ml酸解酪蛋白溶液，45℃杂交10‑15分钟后用0.1×SSC溶液室温洗涤芯片；4)芯片与辣根过氧化物酶标记的生物素抗体杂交，洗涤；5)在芯片上加辣根过氧化物酶的底物进行反应，水洗，干燥后观察结果，芯片表面从金色变为蓝色或紫色表明样品中含有该特异DNA序列。