TNFR-Ig融合蛋白的生产

摘要

本发明提供在细胞培养物中大规模生产二聚体融合蛋白的改良系统，所述融合蛋白由人(p75)肿瘤坏死因子受体(TNFR)胞外配基结合部分连接至IgG1的Fc部分组成，特别是在具有下列一项或多项特征的培养基中：i)累积氨基酸浓度大于约70mM；ii)累积谷氨酰胺与累积天冬酰胺的摩尔比率小于约2；iii)累积谷氨酰胺与累积总氨基酸的摩尔比率小于约0.2；iv)累积无机离子与累积总氨基酸的摩尔比率为约0.4至1；或v)谷氨酰胺与天冬酰胺的组合累积浓度在约16mM和36mM之间。此类系统的应用使能够产生高水平的蛋白质，并减少某些不良因子如铵盐和/或乳酸盐的蓄积。此外，(本发明)还提供了包括温度改变的培养方法，通常包括当培养物达到其最大细胞密度约20-80％时降低温度。备选地或额外地，本发明提供了使培养物中乳酸盐和/或铵盐水平达到峰值后降低的方法。

主权项

在大规模生产细胞培养物中生产TNFR‑Ig的方法，包括步骤：提供细胞培养物，其包括：含有TNFR‑Ig编码基因且该基因可在细胞培养条件下表达的中国仓鼠卵巢细胞；以及含有谷氨酰胺的培养基，其具有每单位体积中累积氨基酸量大于70mM，并且累积谷氨酰胺与累积天冬酰胺的摩尔比率小于2；将所述培养物在起始生长阶段的第一组培养条件下维持足够长的第一段时间，以使所述细胞增殖至活细胞密度达到所述培养物在此第一组培养条件下可达到的最大可能活细胞密度的20％‑80％范围；改变至少一个培养条件，从而应用第二组培养条件；将所述培养物在第二组培养条件下维持第二段时间，使TNFR‑Ig在细胞培养物中累积。