监定木层孔菌属（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）之生物晶片及其方法

摘要

本发明揭露一种生物晶片，系利用细胞核内转录区(Internal transcribed spacer,ITS)基因序列上具有保守性区域增幅、定序、并比分析多种目标病原菌之基因，设计寡核苷酸探针(oligonucleotide probe)，再进行反转式点膜杂合(reverse dot blot hybridization)，由其毛地黄素(DIG)或生物素(Biotin)所标示之探针之呈色反应，可同时、快速、精确监定可引起林木褐根茎腐朽木层孔菌属(Phellinus)中17种重要病原真菌。不但具专一性、精准性，且于尼龙膜上其灵敏度可达1pg/μl，于塑胶晶片可达100fg/μl，仅需7小时即可完成监定林间被此等病原感染之罹病组织或病原证据标本。

主权项

一种监定木层孔菌属(i>Phellinus/i>)之生物晶片，包括：一晶片基材；固定于该晶片基材上之复数个探针，其中该探针系由下列序列所组成：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16之寡核苷酸序列及其完全互补序列，其中当该晶片基材为一尼龙膜时，该生物晶片的灵敏度达到1 pg/μl；当该晶片基材为一塑胶基材时，该生物晶片的灵敏度达到100 fg/μl。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：1所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus apiahynus/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：2所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus cesatii/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：3所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus gilvus/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：4所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus linteus/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：5所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus inermis/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：6所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus lavegatus/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：7所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus melleoporus/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：10所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus pini/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：11所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus quercinus/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：13所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus igniarius/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：14所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus formosanus/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：15所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus pachyphloens/i>菌种。如申请专利范围第1项所述之生物晶片，其中该SEQ ID NO：16所示之序列及其完全互补序列之探针，系用于监定i>Phellinus torulosus/i>菌种。一种监定木层孔菌属之方法，包括：(a)自一待测样品萃取去氧核糖核酸；(b)增幅该待测样品之18S-28S核糖体核酸基因内转录区(ITS)之序列；(c)使用如专利范围第1项所述之生物晶片与步骤(b)增幅所得之产物进行杂合反应；(d)检测步骤(c)之反应结果。如申请专利范围第15项所述之监定木层孔菌属之方法，其中步骤(b)增幅所使用之引子对系标定有一毛地黄素(DIG)。如申请专利范围第15项所述之监定木层孔菌属之方法，其中步骤(b)中增幅所使用之引子对系标定有一生物素(Biotin)。