一种京尼平的制备方法

摘要

本发明属于生物技术领域，涉及一种京尼平的制备方法，它包括固定化酶的制备工艺、栀子苷的转化工艺和京尼平的分离纯化工艺三个部分，其特征在于将产β-葡萄糖苷酶的菌种发酵，待达到产酶高峰后，将发酵液收集，用包埋-交联结合的方法共固定化酶和细胞、或酶和菌丝，制备固定化酶，采用填充床或搅拌式反应器对栀子苷进行催化水解反应，经纯化后得到京尼平。本发明无须对发酵液进行分离纯化，且制备得到的固定化酶活力高，运行时间达960小时后酶活仍保持50％以上，对环境污染小，京尼平产率高，与其他方法相比具有显著的优势。

主权项

一种京尼平的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)将产β‑葡萄糖苷酶的高产菌株发酵48‑150小时，将发酵液连同菌丝一起取出，直接加入终浓度为0.1％‑2％交联材料，和终浓度为0.1％‑2％的交联剂中进行交联，交联时间为0.5‑4小时，交联温度为4‑20℃，或对发酵液连同菌丝进行浓缩后再交联，采用分子量为6000至30000的中空纤维超滤器对发酵液连同菌丝进行浓缩，浓缩至原体积的六分之一至二分之一；所述的产β‑葡萄糖苷酶的高产菌株为黑曲霉、米根霉、或宇佐美曲霉；所述交联材料为壳聚糖或明胶；所述交联剂为戊二醛、碳化二亚胺、三聚磷酸钠、或环氧化合物；(2)将交联后的酶和菌丝液用海藻酸钠进行包埋，海藻酸钠浓度为1％‑6％；(3)将包埋好的混合液逐滴加入氯化钙溶液中进行固定，氯化钙浓度0.5％‑8％，制备固定化酶小球；(4)将制备的固定化酶小球置于室温在0.1％‑1％的氯化钙溶液中进行硬化，硬化时间为1‑3小时；(5)过滤硬化好的固定化酶，置于4℃下保存备用；(6)将固定化酶湿法装柱，再用去离子水配制0.1％‑5％的栀子苷溶液，用乙酸‑乙酸钠缓冲液调节溶液pH为4.5，以每小时0.1‑3个柱体积的流速将栀子苷溶液通过固定化酶柱床，酶解温度为50℃；(7)将转化液用大孔吸附树脂吸附，经洗脱、浓缩、低温干燥得到粉末状京尼平，纯度达95％，再经重结晶后京尼平纯度达98％以上；所述的百分比为重量百分比。