一种食品中2-萘胺的酶联免疫吸附检测方法

摘要

一种食品中2-萘胺的酶联免疫吸附检测方法，属于免疫学检测分析领域。以相同量的抗原包被到酶标板的各孔中，加入待测含2-萘胺食品样品和2-萘胺多克隆抗体后，待测样品中的2-萘胺与固相包被抗原相互竞争有限的一抗，并与之结合，当待测样品的2-萘胺浓度高时，与固相抗原结合的抗体就会减少，反应达平衡时，将上清倾出，用洗液洗涤，与固相抗原结合的抗体留在酶标板孔中，并与加入的酶标二抗反应，此时酶标二抗与被固定的抗体结合量减少，显色反应浅，酶标仪检测450nm处的OD值低，表明抑制率高；反之尔然。据所作标准曲线，算出待测样品中2-萘胺的浓度高低。本发明样品前处理过程简单、耗时少、成本低、反应条件温和、方法环保、能实现食品的大通量检测。

主权项

一种食品中偶氮染料的还原物2‑萘胺的酶联免疫吸附检测方法，其特征在于：（1）抗原的包被将2‑萘胺与卵清蛋白OVA重氮化法偶联，并以此偶联复合物作为包被抗原，以0.05 M、pH 9.6的碳酸钠缓冲液稀释包被抗原，抗原稀释倍数分别为2000、4000、8000、16000倍，向酶标板的每孔中加入上述不同稀释倍数的包被液100μL，4℃孵育过夜，用添加有2％明胶的上述包被缓冲液作为封闭液封闭；（2）竞争反应将免疫制备的2‑萘胺多克隆抗体用抗体稀释液分别稀释1000、3000、9000倍后，加入酶标板中，每孔加50μL，同时分别加入浓度为0 ng/mL，2 ng/mL，5 ng/mL，10 ng/mL，20 ng/mL，50 ng/mL，100 ng/mL的2‑萘胺标准品，每孔加入50μL，37℃孵育1h，然后用PBST洗涤液置于摇床上洗涤3次，每次3min；所述洗涤液PBST：为含有0.05%吐温‑20的0.01M、pH7.4的磷酸盐缓冲液；抗体稀释液：含0.1%明胶的PBST溶液；（3）加酶标二抗加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体GAR‑HRP，用抗体稀释液进行5000倍稀释，每孔加入100μL，37℃温育1h，以PBST置于摇床上洗涤3次，每次3min；（4）显色向酶标板的各孔中分别加入100 μL显色液，于37℃恒温箱中反应15 min，取出酶标板，向每孔加入100 μL终止液2 mol/L的硫酸，用酶标仪测定450nnm处的吸光值A450。