同时快速检测食品中活的鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌的方法

摘要

本发明属于微生物检测领域，公开了一种同时快速检测食品中活的鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌菌的方法。针对鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌菌设计特异性引物，采用叠氮溴化丙锭处理处理取出死菌的干扰，最终提取DNA做多重PCR检测。本方法和经典的细菌分离、鉴定和血清学分型方法相比更快速、准确。

主权项

一种同时快速检测食品中活的鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌的方法，其特征在于包含下列步骤：(1)取食物样本，加缓冲液碾磨制成匀浆液，离心去除加大的食物残渣，取上清得菌悬液，整过程均为无菌操作； (2)取制备好的菌悬液加叠氮溴化丙啶溶液，使叠氮溴化丙啶PMA的终质量浓度为3 μg/mL，混匀后室温避光培养3‑8min，卤素灯曝光，光照交联时样品置于冰上，交联后的悬浮液离心，所得沉淀用沸水浴法提取DNA；（3）所得DNA进行mPCR，体系包含总共10μl反应液，其中，4 μl 制备的模板DNA溶液，2 μl 5×buffer，每条引物的量是15 pmol，1U Taq DNA聚合酶;反应条件是：95℃ 10 min，接着40个循环（94℃ 30 s， 50℃ 30 s，72℃ 1 min），最后 72℃ 延伸10 min；（4）mPCR 反应结束后，进行目的菌检测分析。