一种立体选择性α-羟酸脱氢酶的筛选方法

摘要

本发明提供了一种立体选择性α-羟酸脱氢酶的筛选方法。本发明将待测样品与手性的S-或R-扁桃酸及其衍生物单体进行反应后，取反应转化液添加2，4-二硝基苯肼溶液进行显色反应，若有黄亮色絮状沉淀生成，且添加NaOH溶液后黄亮色的絮状沉淀变成颜色均一的红棕色溶液，则表明待测样品中含有与底物的立体构型一致的脱氢酶；若显淡绿色，表明待测样品中不含有与底物的立体构型一致的脱氢酶。本方法基于简单的显色法能快速的确定被测样品的脱氢酶活性及选择性，具有操作简单，反应灵敏，检测迅速，设备要求低，通用性强等优点，为具有一种光学选择性手性扁桃酸及其相关衍生物脱氢酶的筛选带来了极大的便利。

主权项

1.一种立体选择性α-羟酸脱氢酶的筛选方法，所述方法包括：(1)取被测含有α-羟酸脱氢酶的样品溶于pH为5～9的缓冲液中，添加结构如式(I)所示的α-羟酸的手性单体作为底物至底物终浓度为1～100mM，于20～50℃水浴中进行转化反应；式(I)中，n为1或2，(R)m表示m个R取代基，R为H或卤素，m为1或2；(2)取转化液添加2，4-二硝基苯肼的溶液进行显色反应20～90min，反应结束后，若有黄亮色絮状沉淀生成，且加入NaOH溶液后，黄亮色的絮状沉淀变成颜色均一的红棕色溶液，则表明待测样品中含有与步骤(1)底物的立体构型一致的α-羟酸脱氢酶或含有的α-羟酸脱氢酶没有立体选择性；若显淡绿色，表明待测样品含有的α-羟酸脱氢酶的光学选择性与底物的立体选择性相反。