发明名称 | 成年小鼠神经元的机械分离方法 | ||
摘要 | 本发明涉及生物医学领域,公开了一种成年小鼠神经元的机械分离方法,方法如下:在冰浴组织培养液中采用电子振动切片机制作350-375m厚的成年小鼠脑组织切片,室温条件下保存30-60分钟,于无菌条件下,将脑组织切片放入含有木瓜蛋白酶的组织培养液中,控制温度为32.2-35.3℃,保存30分钟,将脑切片置于盛有HEPES缓冲液的细胞培养皿内,选择所需分离的神经区域,使用细胞分离器分离神经元;筛选健康神经元;本发明通过将原代培养的化学分离方法融入到机械细胞分离中,将脑切片预先用木瓜蛋白酶处理,使中年及老年小鼠的健康神经元可以通过机械分离得到,本方法简单方便,分离效果显著。 | ||
申请公布号 | CN102660506A | 申请公布日期 | 2012.09.12 |
申请号 | CN201210102857.5 | 申请日期 | 2012.04.10 |
申请人 | 浙江大学 | 发明人 | 张若煜;陈怀红 |
分类号 | C12N5/0793(2010.01)I | 主分类号 | C12N5/0793(2010.01)I |
代理机构 | 杭州裕阳专利事务所(普通合伙) 33221 | 代理人 | 应圣义 |
主权项 | 一种成年小鼠神经元的机械分离方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤a:在冰浴组织培养液中采用电子振动切片机制作350‑375m厚的成年小鼠脑组织切片,室温条件下保存30‑60分钟,备用;步骤b:于无菌条件下,将步骤a中的脑组织切片放入含有木瓜蛋白酶的组织培养液中,控制温度为32.2‑35.3℃,保存30分钟,备用; 步骤c:将脑切片置于盛有HEPES缓冲液的细胞培养皿内,选择所需分离的神经区域,使用细胞分离器分离神经元,频率为50‑60Hz,摆动幅度2‑4mm,分离针移动速度0.8‑1.5mm/s;步骤d:筛选健康神经元;筛选标准为:1)细胞轮廓光滑;2)在显微镜倒置光源下,透亮;3)有突触。 | ||
地址 | 310000 浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |