多功能等位基因

摘要

提供了用于对基因组的实施修饰的核酸构建体和方法，其中修饰包含无效等位基因、条件等位基因和包含COIN的无效等位基因。提供了多功能等位基因（MFA），以及用于制备其的方法，其提供了在单次靶向中引入等位基因的能力，其可以用于生成无效等位基因、条件等位基因、或其为无效等位基因且进一步包括COIN的等位基因。MFA包含同源重组酶识别位点对、起动序列和/或药物选择盒、和目的核苷酸序列、和COIN，其中在重组酶作用后，形成具有COIN的条件等位基因。在进一步的实施方案中，第二种重组酶的作用形成仅含有以有义方向的COIN的等位基因。在进一步的实施方案中，通过第三种重组酶的作用形成仅含有以有义方向的起动序列的等位基因。

主权项

一种核酸构建体，其包含：（a）用于将所述核酸构建体导向细胞的核酸的靶基因的靶向臂；（b）就所述靶基因的转录而言以有义方向的起动序列，和以有义或反义方向的药物选择盒（DSC）；（b）以反义方向的目的核苷酸序列（NSI）和COIN；和，（c）在暴露于第一种重组酶后重组以形成条件等位基因的可重组单位，其（i）缺乏所述起动序列和所述DSC，且（ii）含有以有义方向的所述NSI和以反义方向的所述COIN；其中所述可重组单位包含由所述第一种重组酶识别的2个第一对同源重组酶识别位点，由第二种重组酶识别的2个第二对同源重组酶识别位点，和由第三种重组酶识别的1个第三对同源重组酶识别位点；其中所述第一对、第二对和第三对重组酶识别位点由不同重组酶识别。