利用锌指核酸酶敲除牛整合素β6亚基基因的方法

摘要

本发明公开了一种利用锌指核酸酶(ZFNs)敲除牛整合素β6亚基基因的方法，其是根据牛整合素β6基因序列，设计可特异性识别该基因的锌指核酸酶ZFNs，构建表达载体并转染牛的细胞，如成纤维细胞，获得整合素β6亚基基因敲除的细胞。本发明利用ZFNs介导的基因敲除技术，设计合成了可特异性识别并切割整合素β6亚基基因的一对ZFNs，并成功获得整合素β6亚基双等位基因敲除的转基因克隆牛。利用一次转染，得到双等位基因敲除的细胞克隆，省去了药物筛选过程，促进了细胞单克隆的形成，提高了后续转基因胚胎的发育率。在转基因动物体内不含有外源基因，减少了对外源基因生物安全评价的环节。

主权项

一种利用锌指核酸酶敲除牛整合素β6亚基基因的方法，其是根据牛整合素β6基因序列，设计可特异性识别该基因的锌指核酸酶，构建ZFN重组表达载体并转染牛的细胞，获得整合素β6亚基基因敲除的细胞，其特征在于：所设计的一对ZFNs可特异性识别并剪切整合素β6亚基基因，其识别及剪切的β6亚基基因序列如下：TGTTCTTTCTATGTCtaggaaGGAATGATCACGTACAAG；其中，大写字母表示的序列为识别的序列，小写字母表示的序列为剪切的序列。