高表达高比活皮蝇胶原酶突变体序列、毕赤酵母表达质粒的构建及菌株筛选和纯化方法

摘要

本发明涉及皮蝇胶原酶（HlCollagenase）突变体的序列及其分泌表达的酵母菌株HlCollagenase-m/pGAPZα-A/GS115构建的关键技术、构建结果及利用它来生产高活性皮蝇胶原酶的纯化方法。本发明采用基因工程表达的方法生产高活性的皮蝇胶原酶突变体，比活性达到1320国际单位/毫克,表达量达到241毫克/升蛋白，通过纯化可获得纯度达95%以上的目标蛋白皮蝇胶原酶，为皮蝇胶原酶今后的推广使用奠定良好基础。

主权项

一种皮蝇胶原酶（Hl Collagenase）突变体，具体有如下序列ValIleCysGlyGlySerLeuIleAspAsnLysTrpIleLeuThrAlaAlaHisCysValHisAspAlaValSerValValValTyrLeuGlySerAlaValGlnTyrGluGlyGluAlaValValAsnSerGluArgIleIleSerHisSerMetPheAsnProAspThrTyrLeuAsnAspValAlaLeuIleLysIleProHisValGluTyrThrAspAsnIleGlnProIleArgLeuProSerGlyGluGluLeuAsnAsnLysPheGluAsnIleTrpAlaThrValSerGlyTrpGlyGlnSerAsnThrAspThrValIleLeuGlnTyrThrTyrAsnLeuValIleAspAsnAspArgCysAlaGlnGluTyrProProGlyIleIleValGluSerThrIleCysGlyAspThrSerAspGlyLysSerProCysPheGlyAspSerGlyGlyProPheValLeuSerAspLysAsnLeuLeuIleGlyValValSerPheValSerGlyAlaGlyCysGluSerGlyLysProValGlyPheSerArgValThrSerTyrMetAspTrpIleGlnGlnAsnThrGlyIleLysPhe。