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一种团头鲂微卫星家系鉴定方法，其特征包括如下步骤：1)将来自天然群体的团头鲂亲本进行人工繁殖，得到至少50个家系，待鱼苗孵出10天后，从每个家系中随机选取200尾鱼苗混合放入池塘中，作为用于亲子鉴定的家系群体；2)选取步骤1)的团头鲂繁殖亲本的鳍条组织，提取基因组DNA，以DNA为模板，选用12对微卫星引物，对TTF01，TTF02，TTF03，TTF04，TTF05，TTF06，TTF08，TTF09，MAC31，MAC46，MAC50，MAC53共12个微卫星位点进行巢式PCR扩增；3)步骤2)所述的巢式PCR扩增方法中PCR反应体系内包含3个引物：位点特异性正向引物，其5’末端加有M13通用序列；位点特异性反向引物；FAM、NED、HEX三种荧光标记的M13通用引物；PCR反应体系为6μL：50ng DNA，3μL JumpStart Red Mix(购自Sigma公司)，1.5pmol反向引物和1.5pmol的荧光标记通用引物，0.1pmol的含加尾序列的正向引物，100μM的亚精胺；4)团头鲂繁殖亲本在12个微卫星位点的PCR产物经ABI 3730基因分析仪根据荧光标记进行基因型分析，使用P‑LOCI软件模拟分析，筛选出适合鉴定团头鲂混养家系的有效微卫星位点9个TTF01，TTF02，TTF03，TTF04，TTF05，TTF08，MAC31，MAC46，MAC50；5)将团头鲂子代混养1年后，随即选取182尾个体，剪取各个体的鳍条组织，提取个体基因组DNA，选取步骤4)中的9个有效微卫星位点，分析各子代的基因型；6)根据亲本和子代在9个微卫星位点的基因型，对不同家系进行区分，鉴定子代个体的父母本；其中步骤2)所述的12对微卫星引物的核苷酸序列如下所示：TTF01‑F：CAGTCGGGCGTCATCATGGAGATGAAAGCTGAAGGAA(5’‑3’)，R：ATGCACGAACTGCCACATAA(5’‑3’)；TTF02‑F：CAGTCGGGCGTCATCAAAACAGCTGCTACCCTTGGA(5’‑3’，)R：TTTGCCAGAAGAGCAAATCA(5’‑3’)；TTF03‑F：CAGTCGGGCGTCATCAAAGACGCCACGGAAACTTTA(5’‑3’)，R：CTGACCGGATAGCAAAGTGA(5’‑3’)；TTF04‑F：CAGTCGGGCGTCATCAGACTGGAGTCGTCAGGCTTC(5’‑3’)，R：TGCCCCACATTGTTAGACTG(5’‑3’)；TTF05‑F：CAGTCGGGCGTCATCACTAGTGGGTAGGTGGCAGGT(5’‑3’)，R：TGACTGGGAGAGACAGAGGAG(5’‑3’)；TTF06‑F：CAGTCGGGCGTCATCAGGCAGGTCAGGCACATTTAT(5’‑3’)R：TCTCTACCTCACATTCTCTCATTCT(5’‑3’)；TTF08‑F：CAGTCGGGCGTCATCAGGGGAAATAAAGGGAGAAAGTG(5’‑3’)R：TTTCTCCTGATCCGTTGACC(5’‑3’)；TTF09‑F：CAGTCGGGCGTCATCAAAGACGCCACGGAAACTTTA(5’‑3’)，R：GAGGTGGGACTGTGTGGAAT(5’‑3’)；MAC31‑F：CAGTCGGGCGTCATCAGCATCGGTAACAGTCAAA(5’‑3’)，R：CAGGGATAATGTAGGAAGAA(5’‑3’)；MAC46‑F：CAGTCGGGCGTCATCATACAAGAGCAGGTAAGCA(5’‑3’)，R：CAGCCACTGACTGAACAT(5’‑3’)；MAC50‑F：CAGTCGGGCGTCATCAGGTATCGTGCTTGCTTGT(5’‑3’)，R：TTCCATTTAGAGCTACGG(5’‑3’)；MAC53‑F：CAGTCGGGCGTCATCAAGCGGGTCTGTGCTAATC(5’‑3’)，R：CGGCCAGTTCCAAAGAGT(5’‑3’)；步骤3)所述通用引物M13的核苷酸序列如下：M13：5’‑CAGTCGGGCGTCATCA‑3’。 |
