苏木素在检测免疫效应细胞介导的细胞毒效应中的应用

摘要

本发明公开了一种利用苏木素检测免疫效应细胞介导的细胞毒效应的测定方法：将贴壁肿瘤细胞悬液置于细胞培养板中，贴壁后，加入待测免疫效应细胞，构成一定的效靶比，于培养箱孵育适当时间后，取出，弃上清，用PBS洗板3次(以去除效应细胞)后，立即加入4％多聚甲醛固定30分钟，然后加入苏木素染色液，100μl/孔，染色20分钟后，蒸馏水洗3～5次(以去除未结合的染料)，室温晾干；加入1％的盐酸酒精脱色，100μl/孔，脱色后立即用酶标仪测定540nm处的吸光度值并记录，计算各效靶比的杀伤率，公式如下：研究表明本方法具有特异、稳定、简便、经济等优点。

主权项

1.苏木素在检测免疫效应细胞介导的细胞毒效应中的应用，其特征在于：适用于检测人NK细胞系NK92、NKL和YT细胞对人贴壁细胞系SGC7901和Hep2细胞的细胞毒效应，以及检测新西兰白兔CTL细胞对兔鳞癌细胞系VX2细胞的细胞毒效应；应用方法如下：将贴壁肿瘤细胞悬液置于细胞培养板中，贴壁后，加入待测免疫效应细胞，构成一定的效靶比，于培养箱中共孵育适当时间后，取出，弃上清，用PBS洗板3次后，立即加入4%多聚甲醛固定30分钟，然后加入苏木素染色液，100μl/孔，染色20分钟后，蒸馏水洗3～5次，室温晾干；加入1%的盐酸酒精脱色，100μl/孔，脱色后立即用酶标仪测定540nm处的吸光度值并记录，计算各效靶比的杀伤率，公式如下：其中，OD(E)表示效应细胞(E)孔OD值，OD(T)表示靶细胞(T)孔OD值，OD(E+T)表示效应细胞(E)+靶细胞(T)孔OD值；所述苏木素染色液配制方法如下：1.5g苏木素用5ml无水乙醇溶解,蒸馏水溶解钾明矾，加温至90℃,勿煮沸,将溶解的苏木素和碘酸钠同时加入钾明矾水溶液内,流水冷却至室温,再加甘油，震荡1小时后即可使用；所述PBS是指0.01mol/L的磷酸盐缓冲液，PH=7.2。