通过定向进化构建的热稳定性提高的脂肪酶突变体

摘要

通过定向进化构建的热稳定性提高的脂肪酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了由华根霉（Rhizopuschinensis）CCTCCM201021脂肪酶作为亲本，经分子生物学技术而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中，涉及到的氨基酸突变为Met101Thr、Glu107Gly、Ala129Ser、Ser151Asn、Cys160Leu、Lys161Arg、Pro168Leu、Pro168His、Leu180His、Asp182Tyr、Thr183Ala、Thr218Ser、Lys219Asp、Ala230Phe、Ser234Phe、Val261Gly、His317Pro、Val329Ala、Glu363Arg、Asn366Asp、Ser373Cys中的一种或几种。以在65℃下半衰期t50来表示，这些突变体的热稳定性较亲本华根霉脂肪酶得到了提高。本发明也公开了编码脂肪酶突变体的DNA序列、表达载体、宿主细胞。

主权项

通过定向进化构建的热稳定性提高的脂肪酶突变体，其特征在于由亲本华根霉（Rhizopus  chinensis ）CCTCC NO：M 201021脂肪酶进行定向进化，通过易错PCR、DNA Shuffling和定点突变，获得脂肪酶突变体，亲本华根霉氨基酸序列SEQ ID NO: 1中在氨基酸取代位置发生突变，采用“原始氨基酸‑位置‑替换的氨基酸”来表示脂肪酶突变体中突变的氨基酸，所述脂肪酶突变体为：脂肪酶突变体    氨基酸取代位置突变体10    Ser234Phe/Leu180His/Thr218Ser华根霉脂肪酶氨基酸突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO: 2；用于表达所述的脂肪酶突变体的表达载体为：pPIC9K，pPIC3.5K，pPICZα，pPICZ；用于所述的表达载体转化的微生物宿主细胞为毕赤酵母。