沙门菌和志贺菌同步分离、鉴定的试剂盒、制备和应用

摘要

本发明涉及肠道病原菌中沙门菌与志贺菌的同步分离和鉴定方法，主要解决现有沙门菌和志贺菌分离方法存在的漏检率高、鉴定步骤繁复且成本较高、筛选结果不够直观的技术难题。试剂盒包括：1）通用型非选择性增菌液：胰酪胨大豆胨肉汤；2）10倍浓缩通用型非选择性增菌液：10倍浓缩胰酪胨大豆胨肉汤；3）沙门菌增菌液：亚硒酸盐磺绿-磺胺增菌液；4）志贺菌增菌液；5）木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板；6）沙门菌显色琼脂平板；7）沙门菌-志贺菌综合生化鉴定管：包括第一试管和第二试管；8）硫化氢滤纸条；9）吲哚滤纸条。利用选择性分离培养基生长相应的典型菌落形态、简易生化和特异性酶-底物反应组合试验鉴定2种肠道病原菌。

主权项

沙门菌和志贺菌同步分离、鉴定的试剂盒，包括：1）、通用型非选择性增菌液：为胰酪胨大豆胨肉汤：胰化酪蛋白胨17.0g，植物蛋白胨3.0g，氯化钠5.0g，K2HPO4 2.5g，葡萄糖2.5g，蒸馏水1000ml，加热溶解后矫正pH至7.3±0.2，所述矫正pH按冷却至25℃后测量值为标准；2）、10倍浓缩通用型非选择性增菌液：10倍浓缩的1）所述的胰酪胨大豆胨肉汤； 3）、沙门菌增菌液：为亚硒酸盐磺绿‑磺胺增菌液：酵母浸出物5.0g，蛋白胨5.0g，D‑甘露醇5.0g，牛磺酸钠1.0g，磺胺抑制剂0.5g，亚硒酸钠4.0g，KH2PO42.65g，K2HPO41.02g，磺绿5.0mg，蒸馏水1000ml，加热溶解后矫正pH至7.2±0.2，所述矫正pH按冷却至25℃后测量值为标准；4）、志贺菌增菌液：胰化酪蛋白胨20.0g，氯化钠5.0g，KH2PO42.0g，K2HPO42.0g，葡萄糖1.0g，新生霉素0.05g，吐温‑80 1.5mL，蒸馏水1000ml，加热溶解后矫正pH至7.0±0.2，所述矫正pH按冷却至25℃后测量值为标准；5）、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板：琼脂13.5g，乳糖7.5g，蔗糖7.5g，硫代硫酸钠6.8g，L‑赖氨酸5.0g，氯化钠5.0g，木糖3.5g，酵母浸出物3.0g，脱氧胆酸钠2.5g，枸橼酸铁铵0.8g，酚红0.08g，蒸馏水1000ml，加热溶解后矫正pH至7.5±0.2，所述的矫正pH按冷却至25℃后测量值为标准；6）、沙门菌显色琼脂平板：琼脂17.0g，胰化酪蛋白胨10.0g，蛋白胨10.0g，酵母浸出物3.0g，氯化钠5.0g，5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚‑β‑D‑吡喃半乳糖苷250mg，辛酸盐250mg，磺胺抑制剂0.5g，蒸馏水1000ml，按冷却至25℃后测量值为标准调整pH至7.2；7）、沙门菌‑志贺菌综合生化鉴定管：包括第一试管和第二试管；第一试管：琼脂14g，牛肉膏2g，酵母浸出粉2g，葡萄糖1g，蛋白胨15g，甘露醇10g，尿素10g，重量百分浓度为0.2%麝香草酚蓝溶液10ml，重量百分浓度为0.2%溴麝香草酚蓝溶液12.5ml，重量百分浓度为0.2%甲酚红溶液4ml，蒸馏水1000ml，按冷却至25℃后测量值为标准矫正pH至7.1；第二试管：琼脂3g，胰蛋白胨10g，蛋白胨10g，氯化钠5g，重量百分浓度为10%Na2HPO42.5ml，蔗糖10g，重量百分浓度为1%硫代硫酸钠溶液2.5ml，重量百分浓度为0.2%溴麝香草酚蓝溶液5ml，蒸馏水1000ml，按冷却至25℃后测量值为标准矫正pH至7.6； 8）、硫化氢滤纸条；9）、吲哚滤纸条。