一种重组腺病毒及其制备方法和应用

摘要

本发明提供一种表达混合系激酶3羧基末端肽段(589～850aa)的重组腺病毒(Ad-MLK3PRD)，该重组腺病毒的表达产物包含了MLK3中富含脯氨酸结构域。本发明还提供Ad-MLK3PRD的制备方法及其作为神经保护药物的应用。本发明研究结果表明在该重组腺病毒的表达可以干扰MLK3与PSD-95的结合，抑制MLK3的活化及其下游JNKs信号通路的激活，对Aβ神经毒性、缺血性神经元损伤有神经保护作用。Ad-MLK3PRD可以作为MLK3抑制剂以及作为退行性脑病(老年痴呆、帕金森病)、脑卒中和癫痫等神经系统疾病的治疗药物。

主权项

一种重组腺病毒，含有MLK3PRD cDNA以及腺病毒载体，其中所述重组腺病毒通过下述方法制备：1)以SD雄性大鼠海马为材料，提取大鼠海马总RNA；2)以合成的上游引物5’‑ggtacctaatgtcagatgactcatcccc‑3’，和下游引物5’‑gaattctcagggccctgcttctggt‑3’进行RT‑PCR扩增得到MLK3PRD cDNA；3)将获得的MLK3PRD cDNA定向克隆至质粒表达载体，获得重组质粒；4)将步骤3)获得的重组质粒亚克隆至穿梭质粒载体，获得包含MLK3PRD cDNA的穿梭质粒载体；5)将步骤4)获得的穿梭质粒载体与腺病毒载体进行同源重组，获得腺病毒表达载体；6)将步骤5)获得的腺病毒表达载体线性化，转染至腺病毒包装细胞中，扩增、纯化后获得所述重组腺病毒。