土壤中病原细菌的多重PCR检测方法

摘要

一种土壤中病原菌多重PCR快速检测方法，其特征在于，采用多重PCR一次性同时扩增致病性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和福氏志贺菌的特异性基因：phoA、ttrBCA、vicK、ecfX、ipaH和virA，再通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。本发明克服了常规病原菌检测技术操作繁琐，费时耗力等不足，充分发挥多重PCR技术在土壤病原菌检测中的应用，尽量增加病原菌的种类和引物的对数，提高检测的特异性和灵敏度。

主权项

一种土壤中病原菌多重PCR快速检测方法，其特征在于，采用多重PCR一次性同时扩增致病性大肠杆菌phoA、沙门氏菌ttrBCA、金黄色葡萄球菌vicK、铜绿假单胞菌ecfX、和福氏志贺菌的特异性基因ipaH或virA，再通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，其中引物为：致病性大肠杆菌引物为：phoA正向：5′‑TACAGGTGACTGCGGGCTTATC‑3′，phoA反向：5′‑CTTACCGGGCAATACACTCACTA‑3′；沙门氏菌引物为：ttrC‑13：5′‑ACTGCCGATAAATGCACGTT‑3′，ttrB‑1：5′‑CTTTTTTCCGCCAGTGAAGA‑3′；金黄色葡萄球菌引物为：vicK1：5′‑CTAATACTGAAAGTGAGAAACGTA‑3′，vicK2：5′‑TCCTGCACAATCGTACTAAA‑3′；福氏志贺菌引物为：virA‑F：5′‑CTGCATTCTGGCAATCTCTTCACA‑3′，virA‑R：5′‑TGATGAGCTAACTTCGTAAGCCCTCC‑3′；或ipaH‑U1：5′‑CCTTTTCCGCGTTCCTTGA‑3′，ipaH‑L1：5′‑CGGAATCCGGAGGTATTGC‑3′；铜绿假单胞菌引物为：ECF1：5′‑ATGGATGAGCGCTTCCGTG‑3′，ECF2：5′‑TCATCCTTCGCCTCCCTG‑3′。