高纯度低分子量肝素钠的生产纯化方法

摘要

高纯度低分子量肝素钠的生产纯化方法，包括通过酶解、预处理后树脂吸附和洗脱制得未分级肝素钠溶液，然后通过肝素酶酶切、胰脏酶解离结合多次超滤截留，有选择性截获不同分子量范围的肝素钠，从而分离出不同分子量、适合不同领域使用的肝素钠产品；本工艺方法生产周期短，产品收率高，分布均匀，可实现低分子肝素生产的连续化，不会破坏肝素的有效基因成分，保留了生物活性，通过多次除杂，提高了产品纯度和生物利用度，可减少药物临床使用时出现过敏、不适等症状的风险。

主权项

高纯度低分子量肝素钠的生产纯化方法，其特征在于包括下述步骤：第一步：未分级肝素钠溶液的制备①提取将肠粘膜加2‑3倍水于反应罐中以蛋白酶酶解，蛋白酶的用量为肠粘膜重量的5‑8％，酶解温度50‑55℃，pH8.0‑9.5，酶解时间3‑5小时，酶解完毕，过滤，得酶解液；再在酶解液中加入酶解液重量3‑4倍的碱性阴离子交换树脂搅拌吸附，第一次吸附6‑10小时，滤出树脂后，再加入树脂搅拌吸附5‑8小时，过滤，合并两次树脂，弃去滤液；②除杂将所得树脂置于1.5倍量0.5mol/L的NaCl溶液中搅拌40‑45分钟，滤出树脂；③洗脱将树脂置于洗脱罐中，以树脂体积2‑3倍量的浓NaCl溶液进行梯度洗脱，第一次以4.0‑4.5mol/L的NaCl溶液洗脱，洗脱时间6小时，第二次第三次分别用3.0‑3.5mol/L的NaCl溶液洗涤3小时，合并三次洗脱液；④过滤调整洗脱液pH值至11‑12，过滤，滤液再调pH至7.0‑7.5，即可得未分级的肝素钠溶液；第二步：未分级肝素钠溶液的分离纯化①肝素酶酶切降解在所制得的未分级肝素钠溶液中按每g肝素酶中加入12.5L肝素钠溶液的比例加入固相化的肝素酶，缓慢搅拌40‑50分钟，高速离心分离除固相化肝素酶，得酶切降解后的肝素钠溶液；②第1次超滤将所得肝素钠溶液用截留分子量15K的超滤膜超滤，得超滤液I；③胰酶酶解将超滤液I升温至50℃，加超滤液重量0.1‑0.5％的胰酶，调pH值至6.5‑8.5，恒温酶解3小时，然后升温至90℃，冷却后过滤，得滤液；④第2次超滤将所得滤液，用截留分子量10K的超滤膜超滤，收集超滤液II；⑤第3次超滤将超滤液II用截留分子量4K的超滤膜超滤，以超滤液1‑2倍的纯水冲洗2次，分别收集截留液和超滤液III，将截留液冷冻干燥，即得低分子肝素钠；⑥第4次超滤将超滤液III用截留分子量3K的超滤膜超滤，以超滤液2‑3倍量的纯水冲洗3次，收集截留液并冷冻干燥，即可得分子量为3000‑4000的肝素钠。