一种甲型肝炎灭活疫苗及其制备方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，公开了一种甲型肝炎灭活疫苗的制备方法，即培养接种了甲肝病毒L-A-1减毒株的人胚肺二倍体细胞2BS细胞株至病毒增殖高峰期，用胰酶、细胞裂解液常规消化细胞，收获病毒液，经PEG沉淀、氯仿抽提，去除细胞杂蛋白，再经一步凝胶过滤层析纯化、滤膜除菌、超滤膜超滤、氢氧化铝佐剂吸附，制成甲型肝炎灭活疫苗。由此方法制得的甲型肝炎灭活疫苗经小鼠体内效力试验结果表明，半数有效稀释倍数高于参比苗，其免疫原性优于参比苗。本发明所述方法可提高疫苗安全性，简化工艺，降低生产成本，实现甲型肝炎灭活疫苗的规模化生产。

主权项

一种制备甲型肝炎灭活疫苗的方法，包括如下步骤：步骤1：将保藏编号为CCTCC No.V92004的甲型肝炎病毒毒种L‑A‑1减毒株接种于人胚肺二倍体细胞2BS株，培养至病毒增殖高峰期，用胰酶常规消化细胞；步骤2：离心取沉淀加入细胞裂解液在2‑8℃作用16‑24h，所述细胞裂解液为含质量百分比2‑5％乙二胺四乙酸二钠的0.2‑0.5％去氧胆酸钠溶液；步骤3：加入聚乙二醇使其充分作用，离心取沉淀用PBS缓冲液悬浮，加入氯仿抽提，制备粗制甲肝病毒液；步骤4：步骤3制备的粗制甲肝病毒液经凝胶层析纯化后，经0.2μm滤膜除菌，灭活；步骤5：将步骤4制备的甲肝病毒液经超滤膜超滤，经氢氧化铝佐剂吸附，制成甲型肝炎灭活疫苗。