DEVELOPPEMENT D'UN NOUVEAU SYSTEME D'EXPRESSION ET SON UTILISATION POUR LA SURPRODUCTION DE LA PHYTASE DE BACILLUS SUBITILIS US417 CHEZ BACILLUS SUBTILIS 168

摘要

La présente invention concerne la mise au point d'un nouveau système d'expression et son utilisation pour la surproduction de la phytase PHY US417 de bacillus subtilis US417 chez B.subtilis 168. Le gène phyUS417 (avec son promoteur) codant la phytase de B.subtilis US417 a été cloné dans un vecteur appelé pMSP3535 contenant les fonctions de réplication du plasmide pAM β 1 aboutissant à la construction nommée pAF3. Les multimères de pAF3, générés in vitro par ligation de l'ADN linéarisé de ce plasmide (pour la première fois pour un plasmide portant l'origine de réplication de pAM β 1), ont été utilisés pour transformer B.subtilis 168 par compétence naturelle. La souche recombinante ainsi obtenue produit environ 70 à 90 fois plus de phytase (rPHY US417) que la souche sauvage B.subtilis US417 après optimisation des conditions de production. La caractérisation physico-biochimique de rPHY US417 a montré qu'elle présente des propriétés similaires à la phytase PHY US417 sauvage excepté ue thermoactivité et thermostabilité augmentées ce qui lui confèrerait un grand potentiel pour une application comme additif en alimentation animale.