一种固定化酶法转化虎杖材料提高白藜芦醇含量的方法

摘要

本发明提供一种固定化酶法转化虎杖提取液提高白藜芦醇的方法，其采用专用固定化酶对虎杖材料粗提液进行生物转化，短时间内使其中白藜芦醇类似物转化为白藜芦醇，然后采用萃取分离技术获得高纯度的白藜芦醇。本发明可提高虎杖材料中白藜芦醇含量10-20倍，避免了同类技术中转化时间过长、催化时间不易控制以及反应完成后酶无法回收造成成本提高的问题，同时采用层析、结晶等分离、精制技术，获得大于95％的白藜芦醇和一定纯度的副产物大黄素两种产品。

主权项

一种固定化酶法转化虎杖材料提高白藜芦醇含量的方法，其特征在于，步骤包括：a)选择活力大于或等于5000U/g的β‑葡萄糖苷酶，配制20％浓度的酶液；b)将海藻酸钠在常温下置于蒸馏水中并搅拌均匀，海藻酸钠和蒸馏水的重量比为2～5∶100，静置溶胀20min，然后在70～100℃下隔水加热，使其充分溶解，完成后冷却至45℃以下；c)将酶液倾入海藻酸钠凝胶中，充分搅拌均匀，匀速滴入2～5％浓度的CaCl2溶液中形成凝胶颗粒，调整流速使形成的颗粒直径在2～4mm之间，完成后滤出颗粒，使用蒸馏水冲洗后再次加入到2～5％浓度的CaCl2溶液中，于4～10℃下静置4～6h，然后滤出颗粒，用蒸馏水充分冲洗，使用吸水纸张隔纱布将颗粒表面水分吸干，即得固定化酶，密封保存于4～10℃条件下；d)选取虎杖，充分阴干，经粉碎机粉碎，过40～60目筛；e)将粉碎后的虎杖加入浓度为80～95％的乙醇，在30～35℃下对混合体系进行超声波处理，料液比为虎杖∶乙醇＝1g∶3ml，功率80～150W，提取3次，每次1～2h，完成后抽滤并合并滤液；f)将滤液蒸发至原体积的6～9％，然后向其中补充水，调pH至4.0～6.0，备用，补充水量为上步骤中所使用的乙醇体积的5～10％；g)向上步所得提取液中加入固定化酶，提取液∶固定化酶＝1ml∶0.03～0.1g，在45～55℃下低速搅拌15～24h，催化完成后将固定化酶滤出；h)对催化完成后的粗提液按体积比粗体液∶乙酸乙酯＝1∶3～5的比例萃取三次，萃取合并乙酸乙酯，得白藜芦醇粗提物；i)然后柱层析分离，浓缩，结晶，得白藜芦醇精品。