一种石油烃类污染物降解菌剂的生产方法

摘要

本发明涉及一种利用甘薯淀粉废水生产巨大芽孢杆菌石油烃高效降解菌剂的方法，属于环境生物技术领域。石油烃降解株菌采用的是一株分离石油污染土壤的芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)，其菌剂的生产方法包括5个步骤：培养基配制、菌种活化、液体种子制备、液态发酵、菌剂制备，以甘薯淀粉废水提供发酵培养基的主要碳源和水，以玉米秸秆为微生物的载体，制备固体菌剂。本发明技术方案不仅为高浓度甘薯淀粉废水的资源化利用提供了一条新途径，而且生产的石油烃降解菌剂能高效原位修复石油污染的土壤，保护生态环境。

主权项

一种利用甘薯淀粉废水生产巨大芽孢杆菌石油烃降解菌剂的方法，其特征在于：发酵培养基以甘薯淀粉废水为主要原料，生产步骤包括：(1)培养基配制：1)菌种保藏培养基：蛋白胨2g，酵母膏1g，氯化钠5g，琼脂20g，加甘薯淀粉废水至1L，pH7.0‑7.5；2)菌种活化培养基：蛋白胨2g，酵母膏2g，氯化钠5g，加甘薯淀粉废水至1L，pH 7.0‑7.5；3)种子培养基：石油烃含量在2％以上的石油污染土壤1kg，加甘薯淀粉废水至10L，pH7.0‑7.5；4)发酵培养基：石油烃含量在2％以上的石油污染土壤10kg，加甘薯淀粉废水至200L，pH 7.0‑7.5；以上培养基均在115℃‑121℃灭菌15‑30min；(2)菌种活化：挑取巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CGMCC4270菌株接种至菌种保藏培养基平板，划线分离纯化，于30℃培养至有明显的单菌落生长，挑取单菌落接种于菌种活化培养基中，于30℃，150‑200r/min摇床振荡培养12‑36h；(3)液体种子制备：向装有高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照5％‑10％的接种量接种石油烃降解菌，于30℃，通空气培养12‑36h，得到液体种子；(4)液态发酵：向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照5％‑10％的接种量接种石油烃降解菌液体种子，于30℃，通空气培养18‑60h，得到活菌体培养物；(5)菌剂制备：培养好的发酵液经细菌计数后，按照重量比为1∶1与粉碎的玉米秸秆混合均匀，静态通风至含水量30％，包装，保存于干燥阴凉处。