一种产共轭亚油酸微生物发酵剂及其制备方法

摘要

本发明提供了一种产共轭亚油酸微生物发酵剂及其制备方法，以植物乳杆菌CICC23138为出发菌株，0.9％的生理盐水活化后备用；按植物乳杆菌基础培养基的0.1％添加亚油酸，5％接种活化菌种，在37℃厌氧箱内静止培养30小时，作为一级驯化菌株；然后按植物乳杆菌基础培养基的0.2％添加亚油酸，5％接种一级驯化菌株，在37℃厌氧箱内静止培养30小时，作为二级驯化菌株；以此类推，以上一级驯化菌株为种子，进行逐级驯化，进行每一级驯化时，亚油酸添加量按0.1％的剂量递增，直至七级驯化后获得七级驯化菌株；脱脂乳中培养七级驯化菌株，活菌数≥1010个/ml为发酵成熟；将成熟的发酵菌种冷冻干燥制成发酵剂粉末。

主权项

一种产共轭亚油酸微生物发酵剂的制备方法，其特征是：1)以植物乳杆菌CICC23138为出发菌株，量取0.9％的生理盐水10ml于试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将植物乳杆菌CICC23138安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用；2)量取植物乳杆菌基础培养基100ml于250ml三角瓶内，然后按基础培养基体积的0.1％添加亚油酸，121℃灭菌20分钟冷却至37℃，按基础培养基体积的5％接种1)步骤中已经活化的菌种，在37℃厌氧箱内静止培养30小时，作为一级驯化菌株；然后量取植物乳杆菌基础培养基100ml于250ml三角瓶内，按基础培养基体积的0.2％添加亚油酸，121℃灭菌20分钟冷却至37℃，按基础培养基体积的5％接种一级驯化菌株，在37℃厌氧箱内静止培养30小时，作为二级驯化菌株；以此类推，以上一级驯化菌株为种子，接种量按基础培养基体积的5％，进行逐级驯化，进行每一级驯化时，基础培养基中的亚油酸添加量按基础培养基体积的0.1％的剂量递增，直至七级驯化，基础培养基中的亚油酸添加量达0.7％，结束七级驯化后获得七级驯化菌株；其中所述植物乳杆菌基础培养基为：蛋白胨10.0g、牛肉提取物10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、无水乙酸钠5.0g、柠檬酸三胺2.0g、Tween‑801.0mL、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.02g、硫酸锰0.05g、蒸馏水1.0L，pH6.0～6.5，121℃灭菌20min；3)配置10％的脱脂奶乳浊液，向脱脂乳中加入2％的液态甘油、2％低聚木糖、2％葡萄糖，121℃灭菌20分钟冷却至37℃，分别按2％体积比例接种七级驯化菌株，37℃厌氧培养30‑‑36小时，检测生产发酵剂活菌数，活菌数≥1010个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜1010个/ml，继续培养，直至达到1010个/ml；4)将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入‑30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘盛装，放入冻干机进行冷冻干燥，制成发酵剂粉末冻干菌剂。