一种分析糖蛋白的方法

摘要

一种分析糖蛋白的方法，其首先配制点样缓冲溶液、点制芯片、封闭、清洗、干燥后，得凝集素芯片。将生物样品直接加在凝集素芯片上，进行孵育、清洗去除杂蛋白、形成晶体、解离晶体，用飞行时间质谱仪检测荷电离子在真空电场中飞行的时间，得到糖蛋白图谱信息，直观显示被测生物样品中分子量、丰度等糖蛋白信息，鉴定糖蛋白差异表达。将被测生物样品的糖蛋白图谱信息与样本图谱信息进行比照，得到差异表达的糖蛋白信息。本发明解决了背景技术中检测通量低，检测步骤繁琐，周期长的技术问题。本发明操作简便，灵敏度高，重复性好，适合于医学临床的快速分析应用。

主权项

一种分析糖蛋白的方法，该方法的实现步骤包括：(1)制备凝集素芯片：(1.1)点制芯片：将各类凝集素溶于点样缓冲液中，制成1～5mg/mL的点样缓冲液；用芯片点样仪将点样缓冲液点制于衍生化的固相载体上；于25～60℃温育12小时，得凝集素芯片；所述的衍生化的固相载体是环氧乙烷基，或是氨基或巯基基团衍生化的固相载体；所述的固相载体是玻片、金属片、硝酸纤维素膜、瓷片或磁性微粒；(1.2)封闭：用封闭缓冲液对凝集素芯片进行1～2小时封闭；(1.3)保存：用超纯水清洗凝集素芯片，离心干燥后，于4℃干燥保存；(2)加载生物样品：(2.1)将被测生物样品直接加至凝集素芯片上；(2.2)孵育0.5～2小时，糖蛋白糖链通过与凝集素的特异识别结合到凝集素芯片上；生物样品中的特定糖蛋白糖链与凝集素芯片上的凝集素特异识别，结合到凝集素芯片上；(3)去除杂质：用清洗缓冲液清洗凝集素芯片，去除凝集素芯片表面的非特异结合蛋白；(4)形成晶体：将基质加至凝集素芯片上，于室温干燥，则基质与凝集素芯片上与凝集素特异结合的糖蛋白结合形成混合晶体；(5)解离晶体：用激光解吸电离的方法使结合在凝集素芯片上的特定糖蛋白解离，形成糖蛋白荷电离子；(6)绘制质谱图：用飞行质谱仪检测糖蛋白荷电离子在真空电场中飞行的时间，根据得到的糖蛋白图谱信息，绘制质谱图；(7)鉴定蛋白质的差异表达：将被测生物样品的糖蛋白图谱信息与样本图谱信息进行比照，得到差异表达的被测生物样品中的糖蛋白信息。