荧光胶乳定量层析试纸条及其制备方法

摘要

本发明公开了一种快速、简便、操作方便的又可利用荧光定量光谱仪实现检测量的化荧光胶乳定量层析诊断试纸条及其制备方法，该试纸条包括在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，包被膜上设有包被抗体或抗原的检测区和包被有抗鼠抗体控制区，所述玻璃纤维膜涂覆有荧光胶乳微粒标记蛋白。该荧光胶乳定量层析诊断试纸条的制备方法包括荧光胶乳的共价活化；荧光胶乳微粒标记蛋白的制备；抗体或抗原包被到硝酸纤维素膜上及其封闭；在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆荧光胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的试纸条。

主权项

荧光胶乳定量层析诊断试纸条，其特征是，包括在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆有荧光胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，包被膜上设有包被抗体或/和抗原的检测区和包被有抗鼠抗体控制区；所述荧光胶乳定量层析诊断试纸条是通过以下步骤制备得到的：A.荧光胶乳的共价活化：超声波处理胶乳微球体30秒后，调节胶乳微球体浓度为1.0×1012～1.0×1013/ml，10000～15000xg离心5～15分钟，离心后收集沉淀物用蒸馏水或者50mM～200Mm pH6.0～7.0磷酸钠溶液溶解，并超声波200W处理30秒；先加入10～100ul的20～100mg/mlEDC，Votex混匀，再加入10～100ul的20～100mg/ml Sulfo‑NHS，Votex混匀；室温孵育20‑40分钟后10000～15000xg、离心5～15分钟，沉淀用20mM～100mMpH5.0～6.0的柠檬酸缓冲液溶解，放置2～8℃备标记蛋白质之用；B.荧光胶乳微粒标记蛋白的制备：将上述活化后的荧光胶乳超声波200W处理30秒后，按照1ug～125ug蛋白/100ul荧光胶乳的比例加入需标记的蛋白质，Votex混匀后室温搅拌反应1.5‑3小时，2‑4次离心洗涤，每次10000～15000×g、离心5～15分钟，沉淀用PBS‑TBN溶解并超声波100W处理30秒，用PBS‑TBN恢复离心前体积，放置室温，以备涂覆玻璃纤维膜之用；C.抗体或抗原包被到包被膜上及其封闭：分别将抗原/抗体和鼠抗IgG用包被缓冲液调节0.1～3.0mg/ml浓度，膜液量为20ul/27‑35cm，将抗原或/和抗体及鼠抗lgG喷到包被膜上对应的检测区和控制区进行包被，检测区和控制区间隔3‑8mm，室温凉干10‑30分钟；25℃～37℃在封闭液浸泡50‑70分钟，取出后置25℃～37℃烘干处理1‑3小时，封袋，以备试纸板贴板之用；D.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆荧光胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的试纸条。