恩拉霉素高效液相色谱测定方法

摘要

一种恩拉霉素高效液相色谱测定方法，包括，缓冲盐溶液的配制，样品处理，标准品处理，进样，采集图谱记录峰面积，数据处理，面积计算等步骤。本发明的恩拉霉素高效液相色谱测定方法的优点是，1：样品处理简单；2：检测步骤简单，对人员要求不高，这个方法主要依靠仪器分析，简单易学，推广容易；3：检测周期短：上机进样时间为30min，检测当天就能出具结果；4：检测结果相对偏差小：这种方法要求同一操作者对同一试样同时两次平行测定所得结果的相对偏差不大于2%。

主权项

1.一种恩拉霉素高效液相色谱测定方法，其特征在于：它包括以下步骤：（1）、缓冲盐溶液的配制：称取分析纯无水磷酸二氢钠5.999g于干燥洁净烧杯中，加纯水溶解，转移至1000mL容量瓶中，加纯水定容至刻度，摇匀，用磷酸调pH=4.5即得； （2）、样品处理：  称取样品0.5g至250mL具塞三角瓶中，加入按分析纯丙酮:2mol/L盐酸:水=20:1:21比例配制的稀释液78-85mL，超声40min，静置，冷却至室温，或用往复式振荡器振荡150-180min，转移至100mL容量瓶中，用稀释液定容至刻度，振荡使均匀，制备成200ug/ml样品溶液；完毕，用滤纸过滤后，用注射器吸取样品溶液用0.25μm有机滤膜过滤，丢弃第一次滤液，取续滤液于样品瓶中，按批号放入进样盘中，按序列采集，进样，记录色谱图； （3）、标准品处理：称取标准品至50mL容量瓶中，用按分析纯丙酮:2mol/L盐酸:水=20:1:21比例配制的稀释液溶解、定容至刻度，振荡使均匀，配制成浓度为200ug/mL的标准溶液，用注射器吸取标品溶液用0.25μm有机滤膜过滤，丢弃第一次滤液，取续滤至样品瓶中，进样，采集图谱；  （4）、测定法： 取试样滤液20μL进样，记录峰面积，面积计算，即得， 色谱条件：色谱柱：C18反向色谱柱，规格为 250×4.6mm或150×4.6mm ，柱温：30℃， 流速：1.0mL/min ，进样量：20μL ，检测波长：267 nm ，流动相：色谱纯乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钠溶液＝30:70，pH4.5 ，运行时间：30 min ；（5）、数据处理： 样品含量（Py，%）==   Ay（a+b）——样品A、B组分峰面积之和           As（a+b）——标品A、B组分峰面积之和             Cs  ——标品浓度，μg/mL           Ms  ——标品称样量，mg            My  ——样品称样量，mg         Vs  ——标品稀释体积，mL Vy  ——样品稀释体积，mL            Ps  ——标品含量，μg /mg            1000——校正因子，1mg=1000μg ；（6）、偏差： 标样连续进2针，计算（a+b）峰面积的相对标准偏差（RSD），如果RSD不大于2.0%，即可按照标样溶液、试样溶液的顺序连续测定；如果RSD大于2.0%，需要继续进样，直到连续两针之间的RSD不大于2.0%，方可进样； （7）、重复性：由同一操作者对同一试样同时两次平行测定所得含量相对标准偏差不得大于2.0%，取其平均值。