一种在TiO₂表面固定肝素多层膜的方法

摘要

本发明公开了一种在TiO2表面固定肝素多层膜的方法。通过自组装单分子层方法在TiO2表面与生物素之间制备一层与两者分别形成化学键合的中间层，提高固定肝素多层膜的稳定性。用己二胺作为连接剂，使其分别与肝素的羧基和生物素的羧基反应而形成生物素化肝素，从而具有亲和素的识别位点。将自组装单分子层改性后的TiO2涂覆上叠氮化生物素，通过光化学方法在该TiO2表面牢固地固定生物素，利用生物素-亲和素的识别作用组装并形成肝素多层膜。该方法能在钛基金属生物材料表面TiO2薄层或其他材料表面沉积TiO2薄膜后表面牢固固定肝素多层膜，从而使其表面获得优良的抗凝血功能。且其工艺简单，实现容易。

主权项

一种在TiO2表面固定肝素多层膜的方法，其步骤为：A、生物素化肝素的制备在浓度为50mM的2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸溶液中依次加入肝素、N‑羟基琥珀酰亚胺和1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺，使肝素中羧基量、N‑羟基琥珀酰亚胺和1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺三种物质的量的比为1∶0.6∶1，再按己二胺与肝素中羧基的物质的量之比为1.2∶1，加入己二胺，反应后透析除去小分子，得到肝素‑己二胺溶液；另将物质的量与己二胺相等的生物素，加入到浓度为50mM的2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸溶液中，再依次向其中加入N‑羟基琥珀酰亚胺和1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺，使生物素、N‑羟基琥珀酰亚胺和1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺三种物质的量之比为1∶0.6∶1，即得到生物素活化液；将生物素活化液加入到肝素‑己二胺溶液中，反应后透析除去小分子，然后冷冻干燥，得到生物素化肝素；B、有机膦酸单分子层的自组装  将洁净的TiO2材料浸泡在温度为50～120℃、浓度为1～50mmol/L的有机膦酸或磷酸单酯溶液中进行TiO2表面的单分子层自组装，浸泡时间为1～24小时，取出TiO2后清洗；C、固定生物素  将B步得到的单分子层自组装后的TiO2，放入浓度为0.1～0.6mg/ml叠氮化生物素的乙醇溶液中，表面完全润湿后，取出、阴干，紫外光照射1～10分钟使生物素固定在TiO2表面；D、组装亲和素  将C步得到的固定了生物素的TiO2浸泡在浓度为0.1～1mg/ml的亲和素溶液中组装0.5～24小时；E、固定肝素膜  将A步所制得的生物素化肝素配置成浓度为1～10mg/ml的溶液，再将D步得到的组装了亲和素的TiO2置于该溶液中组装0.5～24小时，获得肝素膜；F、重复D、E两步的操作，获得固定了1～50层肝素膜的TiO2。