检测b型流感嗜血杆菌荚膜多糖分子大小的方法

摘要

本发明提供了一种检测b型流感嗜血杆菌荚膜多糖分子大小的方法，它采用4FF凝胶柱替代传统的CL~4B凝胶柱进行检测，通过多糖在色谱柱中的分配系数和多糖在规定分配系数值以前的回收率间接反映多糖分子的大小。本发明的优点在于，操作简便，相比于传统方法，缩短了检测时间，而且检测结果与传统的方法相比无明显差异。

主权项

1.检测b型流感嗜血杆菌荚膜多糖分子大小的方法，其特征在于，它包括以下步骤：A．取2mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液1ml与1mg/ml维生素B12溶液0.2ml混合均匀后加至已平衡的琼脂糖凝胶4FF凝胶柱中；B．用0.2mol/L的氯化钠溶液作为流动相进行洗脱，流速为1~2ml/min，洗脱1.5个柱床体积，洗脱时间1.5~2.5小时；C．使用AKTE检测琼脂糖凝胶4FF凝胶柱，检测波长为206nm，记录色谱图，并对色谱柱进行标定，其中第一峰为蓝色葡聚糖2000峰，记录峰顶的洗脱体积V₀，V₀为空流体积，第二峰为维生素B12峰，记录峰顶的洗脱体积Vi，Vi为柱床体积； D． 取1~2ml浓度为4~6mg/ml的b型流感嗜血杆菌荚膜多糖溶液加至上述已经标定的琼脂糖凝胶4FF凝胶柱中；E．用0.2mol/L的氯化钠流动相洗脱，流速为1~2ml/min，洗脱1.5一个柱床体积，洗脱时间1.5~2.5小时；F．使用仪器AKTE检测琼脂糖凝胶4FF凝胶柱，检测波长为206nm，记录色谱图，记录b型流感嗜血杆菌荚膜多糖洗脱体积Ve，用组分收集器收集洗脱液，每管收集5ml；G．在每管收集液中取1ml，测定多糖含量；H．通过色谱图计算b型流感嗜血杆菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数K_D及为b型流感嗜血杆菌荚膜多糖在K_D＜0.5的回收率Rx，计算式如下：K_D=Rx=*100％其中，Ax为b型流感嗜血杆菌荚膜多糖在K_D＜0.5时的多糖含量，At为b型流感嗜血杆菌荚膜多糖总含量。