北冬虫夏草可结实性母种资源选育方法

摘要

北冬虫夏草可结实性母种资源选育方法，是为了解决目前北冬虫夏草人工栽培中因菌种退化问题而导致的生产用母种种源栽培后不能稳定出草，从而制约北虫草大规模生产所出现的技术问题而设计的。该方法以特殊的鲜北虫草子实体为组分材料，采用无害性表面消毒剂处理材料，在孢子分离后获得菌落，通过可结实性菌丝评价筛选等技术评价程序，获得具有遗传稳定性的北虫草可结实性种源。该种源具有极高的结实性，从而可应用于北冬虫夏草大规模工厂化栽培中。对人工生产功能性北虫草具有重要价值，应用前景广阔。

主权项

北冬虫夏草可结实性母种资源选育方法，是以野生鲜北虫草或人工培育的蚕蛹鲜北虫草子实体作为母种选育初始种源，其特征在于：在对北虫草子实体进行组织分离中采用双氧水作为活体材料消毒剂，而不使用乙醇和生汞作为消毒剂，采用分生孢子涂布法进行母种继代培养，在菌落和可结实性菌丝评价筛选中先后使用了独特的母种培养基及一整套仿野生生态环境培育方法，并通过菌丝显微形态学观察和选择菌落子实体原基形成时间作为选育参数；该方法的具体实现步骤是：1)以野生鲜北虫草或人工培育的蚕蛹鲜北虫草子实体为材料通过组织分离手段获得母种选育初始种源；2)组织分离中不使用乙醇和生汞作为消毒剂处理活体材料，采用5％的双氧水作为活体材料消毒剂，喷雾消毒后20分钟可进行菌种分离工作；3)母种继代培养接种方法采用分生孢子转接法；4)接种后菌管在下列条件下培养：培养温度20℃±2℃湿度60％±5％接种后前2天避光培养，从第3天到第10天全程见光培养，光源采用日光灯照度前低后高，从1500勒克斯到6000勒克斯；5)选择性状优良菌丝的菌管作为后续选育出发菌株；6)模拟北冬虫夏草自然生长环境进行子实体原基诱导，模拟条件为：根据白天和夜晚轮回以12小时为时长，白天给予20℃±2℃6000勒克斯光照，晚上18℃±2℃避光培养，该处理前要在无菌条件下给菌管内菌丝换气，连续处理3天；7)从第4天起以20℃±2℃6000勒克斯光照条件培养，以7‑10天内通过解剖镜或放大镜观察以子实体原基形成多，均匀，色泽深褐菌管为可结实性母种资源；8)对选育的可结实性母种资源进行凹玻片微室无菌培养，在光学显微镜下进行形态观察，根据分生孢子在菌丝体上的着生状态进行判断，最终获得北冬虫夏草可结实性母种资源。