牙源性上皮细胞的培养和扩增方法

摘要

本发明公开了一种牙源性上皮细胞培养和扩增方法，属于细胞培养技术领域。本发明的牙源性上皮细胞培养和扩增方法包括原代上皮细胞的获取和培养、上皮细胞的扩增，其中原代培养包括用分散酶、Ⅰ型胶原酶和DNA酶组成的混合酶消化液对牙源性乳糜状组织进行消化、收集细胞后进行培养，所述混合酶包括分散酶、Ⅰ型胶原酶和DNA酶，传代培养包括用细胞刮刀刮除法结合0.025%-0.25%胰蛋白酶消化法消化细胞、用培养基重悬细胞后进行培养。以此方法传代2-3次，即得到大量纯化的牙源性上皮细胞，经上皮细胞表达标志物CK14鉴定为上皮细胞。本发明克服了牙源性上皮细胞难培养的问题，得到了大量稳定纯化的牙源性上皮细胞，为牙齿发育和再生研究提供了上皮细胞来源。

主权项

一种牙源性上皮细胞的培养和扩增方法，包括原代上皮细胞的获取和培养、上皮细胞的扩增，其特征在于：其中，1）原代上皮细胞的获取和培养包括：（1）用混合酶消化液对牙源性乳糜状组织进行消化，所述混合酶包括分散酶、Ⅰ型胶原酶和DNA酶；（2）用培养液终止消化，用PBS洗涤，离心，去上清；（3）用含上皮细胞生长因子的培养基重悬细胞，置于培养皿中进行培养；（4）当上皮细胞达到复层生长的时候，用胰蛋白酶消化去除成纤维细胞，采用胰蛋白酶消化法结合细胞刮刀刮除法收集剩余细胞，用PBS洗涤，离心、去上清，用含上皮细胞生长因子的培养基重悬细胞，按照3‑5×104个/cm2细胞密度接种于培养皿中培养3‑10天；2）上皮细胞的扩增包括：当细胞生长融合达到皿底面积的80%‑90%时，采用消化和刮除法收集细胞，用PBS洗涤，离心、去上清，用含上皮细胞生长因子的培养基重悬细胞，按照3‑5×104个/cm2细胞密度接种于培养皿中培养3‑10天；以此方法扩增2‑3次，得到纯化的牙源性上皮细胞。