一种荧光原位微量淋巴毒检测方法和试剂盒

摘要

本发明涉及免疫学领域，公开了一种荧光原位微量淋巴毒检测方法和试剂盒。该方法将受者血清中IgG抗体的Fab段与供者淋巴细胞表面抗原结合，洗板后加入由补体和抗人IgG轻链的二抗组成的混合液孵育，使所述二抗的Fab段与受者血清中IgG抗体结合，补体与二抗的Fc段结合，然后由补体介导细胞杀伤效应杀死靶细胞，接着进行荧光染色并利用计数法统计供者淋巴细胞的死亡率。本发明所述检测方法增加了抗人IgG轻链的二抗，以其为桥梁提高了补体结合机率，弥补了传统CDC方法由于受者血清抗体滴度较低而导致补体难以结合IgG抗体的缺陷，提高了检测淋巴细胞毒性的准确性和灵敏度，能够应用于器官移植前的配型检测中。

主权项

一种荧光原位微量淋巴毒检测方法，其特征在于，将受者血清和供者淋巴细胞混匀孵育，使受者血清中IgG抗体的Fab段与供者淋巴细胞表面抗原结合，洗板后加入由补体和抗人IgG轻链的二抗组成的混合液孵育，使所述二抗的Fab段与受者血清中IgG抗体结合，补体与二抗的Fc段结合，然后由补体介导细胞杀伤效应杀死靶细胞，接着进行荧光染色并利用计数法统计供者淋巴细胞的死亡率，所述补体和二抗的体积比为150‑250∶1，所述供者淋巴细胞的存活率大于90%。