EspA人和牲畜预防用出血性大肠杆菌O157:H7疫苗及制备方法

摘要

本发明属于医药生物技术领域，特别涉及一种EspA人和牲畜预防用出血性大肠杆菌O157:H7疫苗及制备方法。它采用将III型分泌蛋白EspA片段连接到pET-28a(+)载体上，构建pET28a(+)-EspA表达载体，并转化到BL21(DE3)工程菌中，IPTG诱导可高效表达EspA蛋白，获得表达目的蛋白的工程菌BL21-pET28a(+)-EspA。本发明制备工艺简单，重复性好，获得目的蛋白纯度高，动物实验表明，本疫苗能有效诱发机体的免疫应答，具有高效、安全、便于分离纯化等优点。

主权项

制备人和牲畜预防用出血性大肠杆菌O157：H7疫苗的方法，包括以下步骤：(1)设计EHEC O157：H7EDL933标准株的EspA基因序列的引物；1)上游引物设计在序列前端加入CC碱基；2)与起始密码子ATG及后面的G构成NcoI酶切位点；3)下游引物去掉终止密码子，填加XhoI酶切位点CTCGAG；4)终止密码子使用pET28a(+)的6个His氨基酸标签后面的密码子；(2)用‑PCR方法扩增获得EspA片段；(3)构建含有EspA基因的pET28a(+)质粒；(4)将表达载体转化到BL21(DE3)工程菌中，异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷(IPTG)诱导高效表达EspA蛋白，获得表达目的蛋白的工程菌BL21‑pET28a(+)‑EspA；(5)发酵BL21‑pET28a(+)‑EspA重组工程菌，大量表达目的蛋白，经纯化获得纯化EspA抗原。