一种大花蕙兰组培苗染菌栽培方法

摘要

本发明提供了一种大花蕙兰组培苗染菌栽培方法。选取石斛小菇真菌为出发菌株，经10次逐级增大培养基大花蕙兰根浓度的驯化培养，分离获得一株适应大花蕙兰根生长环境的真菌。以壳斗科植物叶为真菌载体，通过真菌的扩大培养而制备生产菌。将生产菌按一定比例与普通营养土壤和树皮粉末混合物混合均匀后，作为移栽基质，选择生长良好的瓶苗移栽后充分浇水，置于温室，弱光缓苗，待幼苗恢复生长后，转入正常光照条件下常规栽培管理。

主权项

一种大花蕙兰组培苗染菌栽培方法，其特征是：选取石斛小菇真菌ACCC50928——Mycena dendrobii为出发菌株，经驯化培养，分离获得一株适应大花蕙兰根生长环境的真菌，用于大花蕙兰组培苗的栽培，主要步骤及条件如下(所涉及的比例均为重量百分比)：(1)冻干菌粉末活化，对菌悬液进行驯化培养，其中所述的冻干菌粉末活化方法为：量取0.9％的生理盐水20ml于三角瓶内，经121℃灭菌30分钟冷却至25℃，将石斛小菇安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在25℃恒温箱中静止活化30分钟，备用；驯化培养为：真菌培养基的配制：树皮块粉末2％，大花蕙兰根组织破碎物1％，自来水97％，于121℃灭菌30min后备用；培养条件：将菌悬液按10％的比例接种于上述真菌培养基中，于25℃，摇床培养120小时，摇床转速120转/分钟；将培养后的菌悬液按10％的比例接种于真菌培养基中，此步骤真菌培养基中大花蕙兰根添加量递增1％即为2％，同样的培养条件和培养时间，以此类推，转接培养10次，直至真菌培养基中大花蕙兰根添加量增至10％，结束驯化；(2)生产菌的分离纯化：结束驯化的菌悬液按10倍的比例逐级稀释，然后在无菌状态下涂布于分离菌种的平板上，将平板倒置于25℃恒温培养箱中，培养24小时取出，观察各平板真菌生长情况，选取菌落比较分散的平板作为分离平板，选择平板中菌根组织上或组织周围生长的菌落为生产菌进行斜面保藏，其中所述分离菌种的平板制备：去皮的马铃薯100g切成若干的小块加入适量水煮沸，煮沸开始计时30min，将其滤液加入琼脂20g，葡萄糖10g，加水至1L分装入三角瓶中于121℃下灭菌30min冷却至60℃左右倒入若干无菌平皿中，在无菌状态下使其冷却而凝固作为分离菌种的平板；(3)生产菌发酵剂的制备：将斜面保藏菌种用无菌接种环挑取若干于灭菌的真菌培养基中，于25℃，摇床培养24小时，摇床转速120转/分钟，检测菌悬液活菌数，如果活菌数≥108个/ml，视同为培养成熟，如果活菌数＜108个/ml，继续培养，直至达到108个/ml，将此步骤获得的菌悬液称之为生产菌发酵剂；其中所述真菌培养基的配制：树皮块粉末2％，大花蕙兰根组织破碎物1％，自来水97％，于121℃灭菌30min；(4)大花蕙兰组培苗栽培：选取生长良好，株高7‑15cm，有2‑3条健壮气生根的瓶苗作为移栽材料，开瓶炼苗1‑2天后出瓶，流水冲洗根部残余培养基，剥除老叶，根部沾0.5％Na3PO4后移栽于移栽基质中，充分浇水后置于温室，弱光缓苗至幼苗恢复生长后，转入正常光照条件下栽培管理，其中所述移栽基质制备：将普通营养土和树皮粉末按1∶1的比例混合作为移栽介质，pH值调至5.5左右，调整水分，以手攥成团无液体渗出为宜；成熟的生产菌发酵剂与移栽介质(2‑5)份∶(90‑95)份比例充分混匀后作为移栽基质备用。