基于微间隙阵列电极的电化学侧流免疫定量试纸传感器及其用于检测生物毒素的方法

摘要

本发明涉及一种基于微间隙阵列电极的电化学侧流免疫定量试纸传感器及其用于检测生物毒素如赭曲霉毒素A、伏马菌素B1的方法。传感器包括免疫色谱分析试纸条和电化学检测部分等两部分。该快速检测试纸传感器特异性强，能够实现定量检测，4-40℃都可使用，10min以后便可观察结果，适合于单位或个人对动物源性食品样品中的赭曲霉毒素A或伏马菌素B1进行快速检测，可望成为食品、饲料样品中的赭曲霉毒素A或伏马菌素B1现场筛查提供有效的技术手段。

主权项

一种基于微间隙电极阵列的电化学侧流免疫定量试纸传感器，其特征在于，该传感器包括免疫色谱分析试纸条和电化学检测部分；其中，免疫色谱分析试纸条包括覆盖有一层硝化纤维膜的基片，以及基片上从一侧向另一侧依次排列粘贴的样液吸收垫、碱性磷酸酯酶标记抗体垫、检测反应区和吸水垫；电化学检测部分包括工作电极，印刷在检测反应区的正下面；所述碱性磷酸酯酶标记抗体为碱性磷酸酯酶标记的赭曲霉毒素A或伏马菌素B1单克隆抗体；所述工作电极为常规光刻印刷法制作的微间隙阵列金电极做基片，正负电极均为两个梳形金电极，彼此交叉组成微间隙阵列金电极，梳形齿宽为1μm‑100μm，间隙为1μm‑100μm；再对基片进行硅烷化处理，步骤包括：1)将上述金电极基片用无水乙醇清洗三次，每次1min‑2min；2)将金电极浸入1M的NaOH溶液中25min‑35min，然后用超纯水清洗该电极三次，每次1min‑2min，吹干；3)将经步骤2)处理后的金电极浸入含氨丙基三甲氧基硅烷5％(V/V)的乙醇溶液中，室温下静置23小时‑25小时；再用超纯水清洗三次后吹干，然后对该吹干的工作电极实施以下步骤：1)将所述吹干的工作电极浸入质量分数为2.5％的戊二醛水溶液中，室温下静置1小时；2)取出，用超纯水清洗三次；在上述电极上滴加30μL待测赭曲霉毒素A或伏马菌素B1与牛血清白蛋白或酪蛋白交联物溶液，室温下静置反应1小时；所述交联物浓度为100μg/mL，是溶于0.01mol/L、pH7.4磷酸缓冲溶液而得；3)用超纯水清洗三次，吹干，所得的工作电极保存于4℃备用； 4)将步骤3)所得工作电极印刷在试纸的检测反应区的正下面，并浸泡在银沉积溶液中1min‑2min，再经室温干燥，即得试纸传感器，所述的银沉积溶液为将1mM抗坏血酸磷酸酯，2mM AgNO3的0.1M甘氨酸‑NaOH缓冲溶液而得，溶液pH＝9.0。