一种快速检测醇沉液糖含量的方法

摘要

本发明提供一种快速检测丹参注射液醇沉工艺过程中醇沉液葡萄糖、果糖和蔗糖含量的方法。该方法先收集实际醇沉过程中醇沉液作为校正集样本，再使用液相色谱法检测得到校正集样本中葡萄糖、果糖和蔗糖的含量，然后扫描得到校正集样本的紫外-可见光谱图作为标准光谱图，最后建立紫外-可见光光谱和糖含量之间的定量模型。在分析待测样品时，先用水稀释样品，并且扫描样品的紫外-可见光光谱，然后将待测样品的光谱数据输入定量模型中，即可得到葡萄糖、果糖和蔗糖含量的计算值。本发明的测量方法简单、快速、无污染，可用于丹参注射液醇沉工艺中的糖含量的快速测定，有助于监控醇沉工艺过程，提高过程质量控制水平。

主权项

一种快速检测醇沉液糖含量的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)醇沉液校正集样本的获取将丹参药材水煎得到的提取液浓缩至密度大于1.1g/mL，然后边搅拌边加入v/v为95％的乙醇至酒精计测得上清液中乙醇表观含量v/v为70％，期间不定时吸取不同乙醇表观含量的醇沉液，冷藏后得到的上清液为丹参注射液的一次醇沉液校正集样本，将一次醇沉液回收乙醇并浓缩到密度大于1.0g/mL，然后再次加入v/v为95％的乙醇至酒精计测得上清液中乙醇表观含量v/v为85％，期间不定时吸取不同乙醇表观含量的醇沉液，冷藏后得到的上清液为丹参注射液的二次醇沉液校正集样本；(2)高效液相色谱法测定醇沉液校正集样本的果糖、葡萄糖和蔗糖含量色谱条件：色谱柱为Waters carbohydrate高效糖柱，250mm×4.6mm i.d.，4μm，流动相为乙腈∶水为86∶14，流速为0.8mL/min，柱温为30℃，进样量为20μL，检测器：蒸发光散射检测器，漂移管温度为90℃，雾化气为高纯氮气，雾化气流速为2L/min，增益为1；对照品溶液的制备：取D‑果糖、D‑葡萄糖和蔗糖对照品，精密称定，分别加水制成每1mL含D‑果糖60mg、D‑葡萄糖50mg和蔗糖100mg的溶液，作为对照品储备液，分别量取各对照品溶液，加水稀释制成每1mL含D‑果糖6mg、D‑葡萄糖5mg和蔗糖10mg的混合对照品储备液1及每1mL含D‑果糖0.6mg、D‑葡萄糖0.5mg和蔗糖0.5mg的混合对照品储备液2，取混合对照品储备液1和2，分别加流动相稀释20倍，摇匀，滤过，取续滤液，即得混合对照品溶液1和2；供试品溶液的制备：取醇沉液校正集样本，过滤，量取续滤液加v/v为75％的乙腈稀释4倍，混匀，10000rpm离心10min，取上清液，即为供试品溶液；含量测定：分别精密吸取混合对照品溶液1、2和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按二点法计算丹参注射液醇沉液中果糖、葡萄糖和蔗糖含量，作为参比数据；(3)紫外扫描得到醇沉液校正集样本的紫外‑可见光谱图取丹参醇沉液校正集样本，过滤，量取续滤液，加水稀释，混匀，10000rpm离心10min，取上清液，紫外扫描的光谱区间是190nm～400nm，分辨率为0.1nm‑1nm，获得校正集样本数据集；(4)采用偏最小二乘法或者主成分回归法构建定量模型使用Unscramb或者Minitab软件处理数据，在构建光谱图和糖含量定量模型时使用的方法是偏最小二乘法或者主成分回归法，使用交叉验证法确定最佳主成分数，当定量模型的相 关系数到0.9以上时，认为模型已经建立完成；(5)未知样品中糖含量的快速测定取未知糖含量的丹参注射液第一次醇沉或第二次醇沉工艺过程中获取的醇沉上清液，加水稀释，混匀后10000rpm离心10min，取上清液进行紫外扫描，将光谱数据代入构建的定量模型中，作为预测集，就可得到未知样品中果糖、蔗糖或者葡萄糖的含量。