一种拟穴青蟹胰蛋白酶基因应用于预测蜕壳周期的方法

摘要

本发明涉及一种拟穴青蟹胰蛋白酶基因应用于预测蜕壳周期的方法，包括：(1)抽提总RNA，鉴定总RNA质量，测定RNA含量；(2)测定胰蛋白酶基因的相对表达水平；(3)对需要检测的拟穴青蟹的幼体的胰蛋白酶基因相对表达水平进行检测，然后与溞状幼体I期的相对表达水平相除得出平均值，以此预测蜕壳周期。本发明工艺简单，成本低，能够预测青蟹种苗繁育过程中的蜕壳周期，以满足人们对青蟹生活周期的掌握以及遗传育种中的选用，减少饵料消耗量，提高种苗成活率，从而优化育苗过程。

主权项

一种拟穴青蟹胰蛋白酶基因应用于预测蜕壳周期的方法，包括：(1)取各个溞状幼体时期的青蟹个体，加液氮并研碎，加入盛有裂解液的1.5mL EP管，充分振荡，抽提总RNA，用甲醛变形胶电泳鉴定总RNA质量，然后再用分光光度计测定RNA含量；(2)以上述RNA为模板进行反转录，在反转录得到的cDNA中取2μ1分别稀释101、102、103、104、105、106倍作为模板制作标准曲线，取稀释100倍的模板为对象进行样品测定；进行PCR反应，待反应结束后将胰蛋白酶基因的Ct值代入标准曲线，换算出各自的起始模板量，以16SrRNA基因作为参比基因，将胰蛋白酶基因的计算所得的模板量除以同一个样品中的16SrRNA基因模板量，即得到胰蛋白酶基因的相对表达水平；(3)以溞状幼体I期的胰蛋白酶基因相对表达水平为基准，归一化为1.0000，对需要检测的拟穴青蟹的幼体的胰蛋白酶基因相对表达水平进行检测，然后与溞状幼体I期的相对表达水平相除得出平均值，以此预测蜕壳周期。