一种携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的获得方法及其应用

摘要

本发明公开了一种携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的获得方法及其应用。利用感染南方水稻黑条矮缩病毒的水稻或者冷冻保存的水稻病株饲喂白背飞虱，使白背飞虱获得SRBSDV，之后将带毒的白背飞虱转移至健康水稻上饲喂，直到渡过病毒的循回期，然后利用RT-PCR技术和血清学方法对白背飞虱进行检测，获得携带SRBSDV的白背飞虱，实验证明人工饲喂可使白背飞虱带毒率达50%以上。利用该发明获得的携带SRBSDV的白背飞虱可用于抗SRBSDV单抗的筛选，进行水稻接种实验鉴定水稻的抗性，筛选抗病品种，为抗病育种服务。本发明还可用于研究SRBSDV与媒介昆虫白背飞虱之间的互作关系，为更好的防治该病毒提供有力的理论依据。

主权项

一种携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的获得方法，其特征在于包括如下步骤：1）白背飞虱的获得：从非南方水稻黑条矮缩病毒发生地区的水稻田间采集捕获白背飞虱若虫后在室内用非抗虫水稻品种的无毒稻苗饲养，待白背飞虱成虫交配后单头虫单独产卵，随机抽取群体中10%的白背飞虱用RT‑PCR和dot‑ELISA方法检测带毒情况，保留不带毒雌虫的后代并建立室内种群，以后每代随机抽取种群中10%的白背飞虱用RT‑PCR和dot‑ELISA方法确定白背飞虱不携带南方水稻黑条矮缩病毒，即获得不携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱；2）白背飞虱的获毒：白背飞虱从冷冻保存的水稻或玉米病株中获毒：饲毒前，白背飞虱在滤纸保湿的烧杯中饥饿1～3小时；从‑10℃至‑80℃保存冰箱中取出冷冻保存的病株，放置温室或4℃冰箱中解冻1～3小时后移入烧杯内，每个烧杯放1～10株病株；接入20～300头1～2龄无毒的白背飞虱，烧杯用尼龙纱布封口；把烧杯放入温室或植物生长箱内饲养，温度为26～30℃，相对湿度为60 %～75 %，光周期为16L：8D；饲毒1～2天后将存活的白背飞虱移入生长于温室或植物生长箱的健康水稻苗上喂养，温度为26～30℃，相对湿度为60 %～75 %，光周期为16L：8D，直至渡过病毒的循回期，约12～15天；用RT‑PCR、dot‑ELISA方法检测白背飞虱体内的南方水稻黑条矮缩病毒，分析其带毒率，获得携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱；或者，白背飞虱从种植于温室或植物生长箱内的水稻或玉米病株上获毒：  饲毒前，白背飞虱在滤纸保湿的烧杯中饥饿1～3小时；感染南方水稻黑条矮缩病毒的水稻或玉米病株，用尼龙纱布封口的圆形开口塑料容器封闭在温湿度控制的植物生长箱中培养，每个塑料容器放1～5株病株植物；每个装置中放入20～200头1～2龄无毒的白背飞虱，饲喂培养温度为26～30℃，相对湿度为60 %～75 %，光周期为16L：8D；饲毒2～7天后将存活的白背飞虱移入新鲜健康水稻苗上饲养直至渡过病毒的循回期，约12～15天；用RT‑PCR、dot‑ELISA方法检测白背飞虱体内的南方水稻黑条矮缩病毒,分析其带毒率，获得携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱。