一种黏性末端接头应用于侧翼序列分离的方法

摘要

一种黏性末端接头应用于侧翼序列分离的方法，包括以下步骤：1）提取待测基因组DNA；2）选择同尾酶；设计并合成对应的连接接头；3）用同尾酶酶切基因组，形成具有相同的黏性末端的DNA片段；4）电泳检测酶切质量，并定量DNA片段浓度；将所述接头与基因组酶切产物连接，形成“接头-酶切片段-接头”的DNA片段；5）纯化“接头-酶切片段-接头”的DNA片段，PCR扩增；6）回收步骤3）获得的片段并测序；7）分析测序结果，获得已知序列的未知侧翼序列；8）未知侧翼序列的验证。本发明之侧翼序列分离的方法，连接效率高，通用性高，成本低。

主权项

一种黏性末端接头应用于侧翼序列分离的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）提取待测基因组DNA；2）分析已知序列的酶切位点分布情况，选择一组在已知序列中没有酶切位点的同尾酶；设计并合成该组同尾酶对应的连接接头；3）在同一反应体系中，用该组同尾酶酶切待测基因组；或在不同的反应体系中，分别用同尾酶酶切基因组，形成具有相同的黏性末端的DNA片段；4）电泳检测酶切质量，并定量DNA片段浓度；将所述接头与基因组酶切产物连接，形成“接头‑酶切片段‑接头”的DNA片段；5）纯化“接头‑酶切片段‑接头”的DNA片段，用已知序列的特异引物S1和S2与接头序列设计的引物A1和A2对步骤2）所得“接头‑酶切片段‑接头”的DNA片段进行PCR扩增；6） 回收步骤3）获得的片段并测序；7）分析测序结果，获得已知序列的未知侧翼序列；8）未知侧翼序列的验证。