DNA芯片组合延伸检测碱基连续突变的方法

摘要

DNA芯片组合延伸检测碱基连续突变的方法，已知一段核酸序列的待检样本中的至少一个单碱基的各种可能变化的确定是通过一个杂交到固定的样本核酸序列上的至少一个碱基延伸的组合检测来确定的。本发明的最大优点是实现了分析的序列片段中至少一个碱基变化的同时检测。由于序列是已知的，在没有4个核苷酸全部加入到延伸反应体系的情况下，引物会延伸到与没有加入的核苷酸互补的核苷酸单体前终止。基于这个原理，按照不同序列检测的具体情况，可以设计不同的延伸方法，将荧光标记过的核苷酸单体延伸到序列需要检测的碱基位置，从而获得待检测信息。

主权项

DNA芯片组合延伸检测碱基连续突变的方法，其特征在于已知一段核酸序列的待检样本中的至少一个单碱基的各种可能变化的确定是通过一个杂交到固定的样本核酸序列上的至少一个碱基延伸的组合检测来确定的，具体步骤为：步骤1)扩增：利用包含一个5’端修饰活性基团的PCR引物，对待检样本进行平行扩增；步骤2)DNA芯片及微阵列的制备：将不同待检样本的扩增产物经过浓缩后点样于能与上述PCR引物5’端修饰活性基团结合、经过修饰的玻璃片上，使不同待检样本的PCR产物的一条单链固定在玻璃片上，构建得到包含所有待检样本的一组DNA芯片或者一张芯片上的一组DNA微阵列；步骤3)检测：根据检测位点所包含的可能信息，在不同的DNA芯片或者一张芯片的几个DNA微阵列进行延伸检测；a)在DNA芯片经过变性、并杂交测序引物后，进行包含荧光标记的核苷酸延伸，并记录所有样本该次延伸的结果；b)在DNA芯片经过变性、并杂交测序引物后，先用非标记的核苷酸延伸到需要检测的碱基位置，然后进行包含荧光标记的核苷酸延伸，并记录所有样本该次延伸的结果；c)根据需要，变换不同的非标记、标记的核苷酸延伸方式，按照步骤b)的方式实施检测；最后，将所有检测中不同样本的信息集合，从而实现多样本中一个或者多个单碱基的各种可能变化的检测。