一种淡紫拟青霉生物肥药的制备方法

摘要

本发明提供一种淡紫拟青霉生物肥药的制备方法，属于农业生物技术领域，解决现有技术的中存在的问题，制备方法包括：以淡紫拟青霉为菌株，接种三角瓶液体菌种，以查氏培养基发酵制备生产用液体菌种；以养殖场腐熟或半腐熟的发酵床垫料为基础培养基，配以辅助碳源和水，接种液体菌种，在固体发酵池内厚层通风发酵制备淡紫拟青霉固体发酵培养物；将淡紫拟青霉固体发酵培养物干燥、粉碎，即得。本发明以高效线虫生防菌淡紫拟青霉为菌株，利用养殖场腐熟或半腐熟的发酵床垫料为主要原料，发酵生产淡紫拟青霉生物肥药，作为土壤微生物肥药，可防治寄生性线虫及多种植物病原菌，同时，该肥药能促进植物生长，降低土壤农药残留。

主权项

一种淡紫拟青霉生物肥药的制备方法，其特征在于：所述制备方法的步骤包括：（1）    生产用液体菌种制备：以淡紫拟青霉为菌种制作二级液体菌种，并以查氏液体培养基或PDA液体培养基为生产用液体菌种用培养基，在发酵罐接种二级液体菌种，培养生产用液体菌种；（2）    配置固体发酵培养基，接种步骤（1）所得的生产用液体菌种，转入固体发酵池，厚层通风发酵制备淡紫拟青霉固体发酵培养物；（3）    将步骤（2）的淡紫拟青霉固体发酵培养物，50～80℃烘干，粉碎，即得淡紫拟青霉肥药；所述的步骤（2）的固体发酵培养物制备具体如下：基础培养基60～80重量份，辅助碳源20～40重量份，搅拌均匀后加水，调整含水率为30～50wt%，接种步骤（1）的生产用液体菌种10～15重量份，转入固体发酵池中，通风，在25～30℃下发酵，24～30小时翻动一次，发酵7～9天，即得到淡紫拟青霉的固体发酵培养物；所述步骤（1）中二级液体菌种具体步骤为：A. 固体斜面菌种培养：配置查氏固体培养基或PDA固体培养基，灭菌，划线接种淡紫拟青霉，置于恒温培养箱内25～30℃下培养7～9天；所述固体斜面菌种培养中用的查氏固体培养基配方：NaNO3 3g、K2HPO4 1g、 KCl 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、FeSO4 0.01g、蔗糖30g、琼脂 15～20g、H2O 1000mL，pH自然；所述固体斜面菌种培养中用的PDA固体培养基的制备方法为：称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水1000mL煮沸半小时或高压蒸煮20分钟，纱布过滤，再加10～20g葡萄糖和17～20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤；B. 二级液体菌种培养：二级液体菌种培养基配方与所述固体斜面菌种培养基配方中除不加琼脂外其余成分或制备方法相同，将二级液体菌种培养基按250mL/瓶的量分装于1L的三角瓶中，灭菌冷却后，在无菌操作台上，用接种环从固体斜面培养基保存的淡紫拟青霉中勾取分生孢子一环，接种至三角瓶内液体培养基中，摇床110～150rpm、25～30℃培养4～5天；所述步骤（1）中生产用液体菌种制备步骤中：将所述培养生产用液体菌种中用的查氏液体培养基或PDA液体培养基于气升式发酵罐中装罐、灭菌后，按培养基1wt%的量接种二级液体菌种，控制通气量1∶1、温度25～30℃，发酵培养7～8天，得到淡紫拟青霉的生产用液体菌种；所述步骤（1）中的生产用液体菌种用培养基：查氏液体培养基配方为：NaNO3 3g、K2HPO4 1g、 KCl 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、FeSO4 0.01g、蔗糖30g、H2O 1000mL，pH自然；PDA液体培养基的制备方法为：称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水1000mL煮沸半小时或高压蒸煮20分钟，纱布过滤，再加10～20g葡萄糖，充分溶解后趁热纱布过滤。