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一种人工培养台湾虫草子实体的方法，包括菌种的获得，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No 4147的黄山被毛孢Hirsutellahuangshanensis菌种的获得是通过野外采集成熟的台湾虫草，收集弹射的子囊孢子，转移至无菌的培养基上分离纯化而得，或将子座部分经表面消毒后采用组织分离的方法分离纯化获得菌种，其特征在于台湾虫草子实体的具体培养操作步骤如下：A、斜面试管菌种活化培养将黄山被毛孢Hirsutella huangshanensis菌种接种于斜面试管培养基，温度25℃培养10d，待菌丝长满试管并产孢，得到斜面菌种；斜面试管培养基的原料重量配比为：葡萄糖40g、蛋白胨10g、酵母浸出粉10g、琼脂20g，加水至1000ml，pH6.5；B、液体摇瓶种子培养在500ml三角瓶中装入200ml摇瓶种子培养基，在121℃高温1×105Pa高压下灭菌30min，待自然冷却至室温时，将斜面菌种接种到液体摇瓶种子培养基上，在温度25±1℃、120r/min条件下恒温振荡培养，培养时间为10～15d，得到液体摇瓶种子；液体摇瓶种子培养基原料的重量配比为：马铃薯200g，葡萄糖10g，麦芽糖10g，蛋白胨10g，硫酸镁1.5g、磷酸二氢钾3g、70mg/片复合维生素B 4片·L‑1、柠檬酸三胺0.4g，加水至1000ml；每片复合维生素B含维生素B13毫克、维生素B21.5毫克、维生素B60.2毫克、烟酰胺10毫克；C、菌丝培养在350ml干净的罐头瓶中加入20g大米，按料水比1∶1.8～1∶2.0的比例加入罐头瓶固体菌丝培养液，pH值为4～6，搅拌均匀，用耐高温聚丙烯封口膜覆盖，外边用报纸包扎好，浸泡2小时，在121℃高温灭菌30min，自然冷却，得到大米培养基；在无菌条件下，用高速分散器将液体摇瓶种子打散，将液体摇瓶种子接种到大米培养基上，每瓶大米培养基中的接种量为10ml；紧密封口，置于25℃的人工气候箱中，菌丝培养阶段，需保持黑暗条件；温度25℃，相对湿度在50％～60％，培养30～40d，使菌丝铺满罐头培养瓶；罐头瓶固体菌丝培养液为：马铃薯200g、葡萄糖10g、麦芽糖10g、蛋白胨10g、硫酸镁1.5g、磷酸二氢钾3g、复合维生素B 4片·L‑170mg/片、柠檬酸三胺0.4g，加水至1000ml；每片复合维生素B含维生素B13毫克、维生素B21.5毫克、维生素B60.2毫克、烟酰 胺10毫克；D、子实体培养将罐头培养瓶置于湿度70％～80％、温度25±1℃条件下的人工气候箱中培养；在子实体培养阶段打开培养箱光源，保证有充足的光照，光照强度为1500lux，光照时间12h，光照12h或黑暗交替进行；在子实体基本长满瓶，不再生长并保持健壮的时候即得到人工培养的台湾虫草子实体，人工培养的台湾虫草子实体呈棒状，橙黄色或橙红色，长度和大小与野生台湾虫草类似。 |
