重组鸡马立克氏病病毒SC9-1株和SC9-2株的构建和应用

摘要

本发明涉及重组鸡马立克氏病病毒SC9-1株和SC9-2株的构建和应用。本发明的重组病毒构建方法解决了连续二次采用两端含有flp识别位点kanr基因敲除同一病毒基因组上二个特定功能基因后无法用现行方法再敲除kanr基因的技术难点；所获得的重组病毒MDV SC9-1株和MDV SC9-2用作马立克氏病活疫苗的生产毒株所制备的疫苗，预防超强毒或新出现的特超强毒MDV诱发的鸡马立克氏病，其保护性免疫效果优越于目前国内外市场上应用最广泛的CVI988/Rispens株疫苗；该重组病毒的抗原性应比美国已发表的同类病毒rMd5Δmeq更类同于的流行株，不仅不会诱发肿瘤，也没有免疫抑制作用，因而更实用于。

主权项

一种重组鸡马立克氏病病毒的基因组构建物，其特征在于所述基因组构建物上带有三个位于特定位点的特定序列，此特定序列还可作为本病毒的鉴别性标志：(1)在原有的二个Meq基因位点，在敲除Meq基因后，各留下一个34bp的序列5：FRT：5′‑GAAGTTCCTA TACTTTCTAG AGAATAGGAA CTTC‑3′；敲除二个Meq基因后，MDVSC9‑1株和MDV SC9‑2株完全没有致病性；(2)在病毒基因组的US/TRS片段连接点的上游约370bp处插入了一段约539bp的REV‑LTR片段序列6：5′‑CATTGTGGGAGGGAGCTCCGGGGGAATGTGGGAGGGAGCTCCGGGGGGAATAGCGCTGGCTCGCTAACTGCCATATTAGCTTCTGTAGTCATGCTTGCTTGCCTTAGCCGCCATTGTACTTGATATATTTCGCTGATATCATTTCTCGGAATCGGCATCAAGAGCAGGCTCATAAACCCATAAAAGGAAATGTTTGTTGAAGGCAAGCATCAGACCACTTGCACCATCCAATCACGAACAAACACGAGATCGAACCATCATACTGAGCCAATGGTTGTAAAGGGCAGATGCTATCCTCCAATGAGGGAAAATGTCATGCAACATCCTGTAAGCGGCTATATAAGCCAGGTGCATCTCTTGCTCGGGGTCGCCGTCCTACACATTGTTGTGACGTGCGGCCCAGATTCGAATCTGTAATAAAAGCTTTTTCTTCTATATCCTCAGATTGGCAGTGAGAGGAGATTTTGTTCGTGGTGTTGGCTGGCCTACTGGGTGGGGTAGGGATCCGGACTGAATACCGTAGTATTTCGGTACAACAA‑3′。