极端耐旱齿肋赤藓单株克隆系的保存、活化及快速扩繁方法

摘要

本发明涉及一种极端耐旱齿肋赤藓单株克隆系的保存、活化及扩繁方法，该方法是将剥离出复水后的野生齿肋赤藓鲜绿的叶片，接种至改良的Knop固体培养基上，再转接至新鲜改良的Knop固体培养基中生成大量单株克隆再生苗；将再生苗缓慢干燥后，置于超低温冰箱长期保存；保存的材料经缓慢复水后，再进行扩大培养获得大批量的纯系材料。本发明所述方法可从一个叶片或外植体在1-2个月内快速克隆出大批量的单克隆系，为齿肋赤藓作为抗旱研究的模式植物提供持续的纯系材料，同时为“沙漠地毯工程”提供方法依据。实现齿肋赤藓单克隆纯系材料的永续获得以及扩大。本发明所述方法简便、成本低、周期短、获得的单株克隆系发育程度一致。

主权项

一种极端耐旱齿肋赤藓单株克隆系的培养、保存、活化及快速扩繁方法，其特征在于按下列步骤进行：齿肋赤藓的组织培养：a、将野外采集的齿肋赤藓洗净后，剥离假根、茎和叶子，剥离出复水后的野生齿肋赤藓鲜绿的叶片，无菌水震荡洗涤5次，然后接种至改良的Knop固体培养基上，置于光照培养箱中培养，培养温度为白天25℃，晚上15℃，光照周期为白天14h，晚上10h，光照强度为4000lx，湿度为50％，培养2‑3周，产生的大量原丝体；b、将步骤a中产生的原丝体继代至新鲜的Knop固体培养基上继续培养7‑10天，培养温度为白天25℃，晚上15℃，光照周期为白天14h，晚上10h，光照强度为4000lx，湿度为50％，产生大量的齿肋赤藓单株克隆再生苗；齿肋赤藓的保存：c、将步骤b齿肋赤藓单株克隆再生苗，经室温缓慢干燥24小时后装于灭菌的1.5mLEP管中，置于超低温冰箱长期保存；齿肋赤藓单株克隆的活化：d、取出超低温保存的齿肋赤藓单株克隆，置于室温或冰上放置30min后，接种至改良的knop固体培养基中，置于光照培养箱中复苏1天，然后将完整植株切割剪碎或将完整的植株接种至改良的Knop固体培养基或将完整的植株在沙土基质中扩繁；齿肋赤藓单株克隆的快速扩繁：e、将完整植株切割剪碎活化的单株克隆系用喷洒的方式接种再生苗的碎片，在改良的Knop固体培养基中10天就开始出现大量的原丝体和单株克隆小苗雏形；或将完整的植株接种至改良的Knop固体培养基上继代培养，每隔10‑15天继代一次，培养温度为白天25℃，晚上15℃、光照周期为白天14h，晚上10h，光照强度为4000lx，湿度为50％，即可获得大量的单克隆株系；土培苗的扩繁培养：先将沙土用改良的Knop液体培养基浸湿，将 活化后的完整的植株喷洒至沙土培养基中，室温培养，光照白天12h，晚上12h，湿度为50％，光强为4000lx，即可获得大量的单克隆株系。