一种改进的CLIP法鉴定RNA结合蛋白的靶标RNA的方法

摘要

本发明公开了一种紫外交联-免疫共沉淀法鉴定RNA结合蛋白的靶标RNA方法，该方法采用微球菌核酸酶（micrococcalnuclease）来替代RNaseA和RNaseT1来做不完全酶解，通过酶解结束后通过去除溶液中的钙离子（Ca2+）即使该核酸酶完全失活。此外在酶解结束后采用先连接5’RNAlinker再连接3’RNAlinker的方式来给靶标RNA的两端加上接头。本发明使用微球菌核酸酶作部分RNA消解，有效地减少了靶标RNA的降解；采用先连接5’RNAlinker的方案，克服了可能存在的蛋白复合物在3’端形成的空间位阻，提高了CLIP技术的成功率。

主权项

微球菌核酸酶在紫外交联‑免疫共沉淀技术中的应用。