一种苹果汁中脂环酸芽孢杆菌PCR快速特异性检测方法

摘要

本发明公开了一种苹果汁中脂环酸芽孢杆菌PCR快速特异性检测方法，该方法使用微波直接从果汁样品中提取DNA，根据GenBank中提供的AlicyclobacillusacidoterrestrisDSM3922T的鲨烯环化酶（Shc）基因序列设计了一对特异性引物，将模板DNA、引物JLX-F和引物JLX-R构成25ul体系进行PCR扩增，1%琼脂糖凝胶电泳检测在648bp处获得目的条带，即得检测结果。并分别对引物特异性、微波提取DNA的扩增效果及检测灵敏度进行了研究，验证，其检测时间缩短，检测成本降低，能够实现从苹果汁生产的在线检测。

主权项

一种苹果汁中脂环酸芽孢杆菌PCR快速特异性检测方法，其特征在于，具体按下列步骤进行：1）取1ml果汁菌悬液，经10000r/min离心2min，弃上清，加50ul双蒸馏水重悬；2）重悬后的菌体经微波1000W处理60s，5000r/min离心1min，取上清，得到模板DNA；3）设计一对SHC引物JLX‑F和JLX‑R，其中：引物JLX‑F：5'‑CGGCACCTGGTCCATTTATC‑3'引物JLX‑R：5'‑TCGAGCCCTTCAAACCCTTT‑3'；4）将模板DNA、引物JLX‑F和引物JLX‑R构成25ul体系进行PCR扩增；5）以1%琼脂糖凝胶电泳检测，根据能否获得648bp处的条带来判断检测结果。