一种通过孢子分离来制作虫草第一代母种的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体涉及到一种通过孢子分离来制作虫草母第一代种的方法。具体包括：选用瓶口直径约6～8cm的广口培养皿或平底罐头瓶作为孢子采集容器，并装上营养全面的培养基；采用即将成熟的虫草子实体，将其放置于培养基上方，使虫草子实体头部弹射的孢子撒落在培养基上，并在合适的培养环境下萌发成菌丝，再经过提纯复壮培养而得优良、纯正、健壮、适龄的虫草第一代母种。通过实施本发明，实现生产栽培北虫草优质、高产奠定了扎实的基础，值得大力推广。

主权项

一种通过孢子分离来制作虫草第一代母种的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)孢子采集的容器选择：选用瓶口直径约6～8cm的广口培养皿或平底罐头瓶作为孢子采集容器；(2)1000毫升培养基的原料组成及制备方法：马铃薯250克、葡萄糖20克、蚕蛹粉20克、琼脂20克、蛋白胨5克、酵母膏(粉)6克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁1克、VB15片、VB61片、VB121片、水1000ml；制备过程是首先将马铃薯削好皮并洗干净，切成厚度为3～4毫米的片状，然后同时和1000ml水放入锅中加热煮沸到马铃薯酥而不烂，再通过过滤取得澄清液；接着依次往澄清液添加葡萄糖、蚕蛹粉、琼脂、蛋白胨、酵母膏(粉)、磷酸二氢钾、硫酸镁、VB1、VB6、VB12，并将溶液的PH调节至6.5～7，最后再次加热至溶液沸腾而得培养基；(3)培养基装瓶灭菌：趁热将培养基分装于各孢子采集容器瓶里，培养基装入瓶中的厚度为0.5～0.8cm，瓶口安置上孢子分离所用的不锈钢铁钩，瓶口先用13～15cm见方的高密度无纺布密封并扎上橡皮圈，再盖上13～15cm见方的聚丙烯薄膜再扎上第二道橡皮圈封口防水，然后按常规灭菌后冷却，使培养基凝固于瓶中；(4)用于孢子分离的子实体选择：选取能代表原始菌株性状、健壮、产量高、形态好、孢子个头大、即将成熟的虫草子实体用于孢子分离；(5)子实体上瓶：在无菌环境下用镊子夹断子实体，夹取子实体孢子头部，将孢子头直接插于安置在瓶口的不锈钢铁钩上，封好无纺布盖，在封薄膜时不要全封，留一个小指头大小的透气的角孔；(6)孢子分离：将子实体已经上瓶的瓶子放于温度是22～23℃、空气相对湿度是75～80％、光照是300lx的环境中培养，3～4天后原先光洁的培养基表面会有孢子菌落出现，随后的几天会在培养基表面长满白色菌丝；(7)菌丝转管提纯：在培养基表面基本布满白色菌丝时，在无菌环境下将菌丝转接于试管斜面上进行提纯，提纯时在培养基表面的菌丝生长均匀处用接种针(钩)挑取0.3～0.5cm见方且带培养基的菌丝体，转接于试管斜面上，并按常规培养至菌丝长满试管斜面；(8)试管种转色贮存：将通过转管提纯且菌丝长满试管斜面的试管放置在温度是22～23℃、空气相对湿度是75～80％、光照是200～300lx的环境中培养，并培养至试管内菌丝的色泽转变为桔红色，将转色正常、无污染的试管母种放置于冰箱2～4℃环境中冷藏贮存。