CpTI酶联免疫检测试剂盒、其制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种用于检测豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白的酶联免疫试剂盒，本发明通过亲和层析法，获得了高纯度的豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白，以此作为免疫原免疫动物制备得到了具有高底物专一性以及灵敏度的豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白抗体，本发明将此抗体用于豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白的检测，特别是转基因植物的胰蛋白酶抑制剂蛋白的检测，取得了良好的效果。

主权项

一种制备豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白的方法，其包括步骤：制备豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白粗品：将豇豆种子浸泡3～4小时，去掉种皮，4℃条件下用粉碎机粉碎，种子粉碎后，加入5～10倍豇豆种子量的醋酸钠溶液搅拌提取12～18小时，单位为W/V，得粗提液；将粗提液离心，取上清，用0℃的饱和度为60％的硫酸铵沉淀，离心，保留沉淀，得豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白粗品；用亲和层析法纯化豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白粗品，在亲和层析后进一步采用电泳分离；所述亲和层析的方法是将豇豆蛋白酶抑制剂蛋白粗品用少量平衡液溶解后，加入预平衡的色谱柱，经清洗后，洗脱得到豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白，其中平衡液和冲洗液的配制为：50mM Tris‑HCl+0.01～0.1M CaCl2，pH8.0；洗脱液的配制为：0.01～0.1MHCl+0.3M NaCl+0.01M CaCl2；所述亲和层析所用色谱柱的填料为CNBr‑activated sepharose 4B。